益腎化瘀方拮抗腎間質(zhì)纖維化有效部位篩選及對UUO大鼠腎組織α-SMA、E-cadherin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：益腎化瘀方是張琳琪教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)化裁而成，在臨床運(yùn)用中發(fā)現(xiàn)益腎化瘀方能夠有效改善慢性腎臟病的進(jìn)展；在既往實(shí)驗(yàn)研究中也證實(shí)益腎化瘀方具有改善實(shí)驗(yàn)動物腎間質(zhì)纖維化的作用。通過采用系統(tǒng)溶劑萃取法對益腎化瘀方進(jìn)行篩選，獲得4個不同極性部位，動態(tài)觀察其對單側(cè)輸尿管梗阻后的（UUO）模型大鼠腎功能、腎組織形態(tài)學(xué)變化，腎組織中Col-I、Col-IV、Hyp含量的改變以及病理過程中α-SMA、E-cadherin表達(dá)的變化，探討其各部位間抗腎

2、間質(zhì)纖維化的可能的作用機(jī)制。
　　方法：采用系統(tǒng)溶劑萃取法對益腎化瘀方進(jìn)行萃取，按照極性從小到大萃取出石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水飽和4個極性部位。同時(shí)將147只SPF級雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、益腎化瘀方石油醚部位組、益腎化瘀方乙酸乙酯部位組、益腎化瘀方正丁醇部位組、益腎化瘀方水部位組和纈沙坦組，每組各21只，單側(cè)輸尿管結(jié)扎法建立腎間質(zhì)纖維化大鼠（UUO）模型。各組動物均在造模次日開始灌胃，假手術(shù)組和模型組以等體積生

3、理鹽水灌胃，余分別灌服益腎化瘀方石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水飽和4個不同極性部位的藥物（相當(dāng)于益腎化瘀方16g/kg/d），纈沙坦組灌服纈沙坦混懸液13.3mg/kg.d，按2ml/100g/d灌胃。大鼠分別于術(shù)后第3、7、14d，每組隨機(jī)選7只，腹主動脈取血檢測腎功能；分別采用 HE和Masson染色于光鏡下觀察梗阻側(cè)腎組織形態(tài)學(xué)改變，堿性水解法測 Hyp含量，ELISA法測 Col-I、Col-IV含量，免疫組織化學(xué)染色法檢測腎組織

4、α-SMA和E-cadherin的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　(1)各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腎功能的影響
　　假手術(shù)組大鼠血清BUN、Scr和CysC各時(shí)間點(diǎn)均無明顯變化；UUO模型組大鼠血清中BUN、Scr和CysC隨著時(shí)間的延長而逐漸升高；各藥物組干預(yù)后大鼠血清 BUN、Scr及 CysC在各時(shí)間點(diǎn)明顯低于模型組；其中在益腎化瘀方各部位治療組，以正丁醇部位組效果最為明顯，和纈沙坦組二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(2)各組

5、大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)的影響
　　HE、Masson染色顯示：假手術(shù)組大鼠各時(shí)間點(diǎn)腎組織結(jié)構(gòu)無明顯變化；UUO模型組大鼠腎組織病變最為嚴(yán)重，且隨時(shí)間延長而逐漸加重，主要表現(xiàn)為小管的擴(kuò)張、炎癥、水腫等，纖維化隨時(shí)間延長逐漸加重；各藥物干預(yù)組大鼠腎組織病變在各時(shí)間點(diǎn)明顯輕于模型組，其中在益腎化瘀方各部位治療組，以正丁醇部位組病變最輕。
　　(3)各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腎組織中Hyp含量的變化
　　假手術(shù)組大鼠腎組織中Hyp含量各

6、時(shí)間點(diǎn)均無明顯變化；UUO模型組大鼠腎組織中Hyp含量明顯升高，且隨時(shí)間延長而逐漸增多；其余各藥物干預(yù)組大鼠腎組織中Hyp含量均低于模型組，其中在益腎化瘀方各部位治療組，以正丁醇部位組效果最為明顯，和纈沙坦組二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(4)各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腎組織中Col-I、Col-IV含量的變化
　　假手術(shù)組大鼠腎組織中Col-I、Col-IV含量無明顯變化；UUO模型組大鼠腎組織中Col-I、Col-IV含量明顯升高，且

7、隨時(shí)間延長而增多；其余各藥物干預(yù)組大鼠腎組織中Col-I、Col-IV含量均低于模型組，其中在益腎化瘀方各部位治療組，以正丁醇部位組效果最為明顯，和纈沙坦組二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(5)各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腎組織中α-SMA、E-cadherin表達(dá)變化的影響
　　假手術(shù)組大鼠腎組織中僅見動脈中層平滑肌細(xì)胞中有少的α-SMA表達(dá)，而腎小管和間質(zhì)細(xì)胞均無表達(dá)，且在各時(shí)間點(diǎn)無明顯變化；UUO模型組大鼠3天后腎間質(zhì)中出現(xiàn)大量棕黃色α

8、-SMA陽性細(xì)胞表達(dá)，且隨著時(shí)間的延長表達(dá)明顯增多；各藥物干預(yù)組大鼠腎組織中在各時(shí)間點(diǎn)α-SMA的表達(dá)均少于模型組，其中在益腎化瘀方各部位治療組，以正丁醇部位組效果最為明顯，和纈沙坦組二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，E-cadherin則相反。
　　結(jié)論：
　　1.采用系統(tǒng)溶劑萃取法，成功獲得益腎化瘀方石油醚部位、益腎化瘀方乙酸乙酯部位、益腎化瘀方正丁醇部位和益腎化瘀方水部位。4個極性部位中，益腎化瘀方正丁醇部位能夠顯著減輕 UUO大鼠腎

9、組織病理學(xué)損傷，并且降低UUO大鼠血清 BUN、Scr、CysC水平，降低腎組織中Hyp含量，其作用與纈沙坦療效相當(dāng)，而其余3個極性部位的改善作用較小，證實(shí)益腎化瘀方正丁醇部位具有較好的延緩腎間質(zhì)纖維化作用。
　　2.益腎化瘀方正丁醇部位能夠顯著降低腎組織中Col-I、Col-IV含量，抑制大鼠腎組織中α-SMA的表達(dá)、上調(diào) E-cadherin的表達(dá)，表明其可以通過減少 ECM的集聚,減輕腎間質(zhì)纖維化的程度，從而達(dá)到拮抗腎間質(zhì)纖