增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞及其相關(guān)exosome抗肝癌免疫效應(yīng)的實驗研究.pdf

1、Y1407420分類號：100602密級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼學(xué)號l006220061027夭淬醬科^垮TlANJ“IMEDlCALUNIVERSITY博士學(xué)位論文DoCToRALDISSERTATION論文題目：增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞及其相關(guān)exosome抗肝癌免疫效應(yīng)的實驗研究TITLEExperimentalStudyOilEnhancingtheAnti—hepatomaImmunityMediatedbyDendri

2、ticCellsandTheirRelatedExosomes一級學(xué)科：中西醫(yī)結(jié)合二級學(xué)科：中西醫(yī)結(jié)合臨床論文作者：吳塵軒指導(dǎo)教師：杜智教授導(dǎo)師組成員：王毅軍高英堂朱爭艷天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二零零八年五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文II類分子水平；觀察黃芪甲苷對DC刺激淋巴細(xì)胞增殖的影響；MTT法測定黃芪甲苷作用下DC及Dexo誘導(dǎo)的CTL對SMMC7721特異性殺傷效應(yīng)。結(jié)果1三種來源的單核細(xì)胞均可體外誘導(dǎo)培養(yǎng)為具有典型形態(tài)和表型的DC；

3、術(shù)中失血來源DC表面標(biāo)志物表達(dá)水平稍低，但較未誘導(dǎo)前有顯著的提高。2應(yīng)用少量細(xì)胞培養(yǎng)上清(60～80mL)提取exosome；Dexo和Texo具有相似的形態(tài)特征；前者表達(dá)CD40、CD80、CD8l、CD86、CD54、MHCI、MHCII(HLADR)；而后者CD40缺乏，CD80、CD86和MHCII(HLADR)相對低表達(dá)；二者在DC參與下均可顯著刺激淋巴細(xì)胞增殖及IL一2分泌，且能激發(fā)較強(qiáng)的針對SMMC7721的特異性細(xì)胞毒作

4、用，效果高于致敏DC組(尸005)：Dexo具有刺激淋巴細(xì)胞活化增殖的作用，并可誘導(dǎo)具有特異性殺傷活性的CTL，殺傷效率(％)明顯高于單純Texo(30934111VS10244737，P=0004)，但低于致敏DC組(30934111％VS43764893％；P=0050)。3黃芪甲苷作用下DC生長狀態(tài)及形態(tài)特征較常規(guī)誘導(dǎo)組無明顯差異；各表面標(biāo)志較常規(guī)誘導(dǎo)組均有不同程度上調(diào)，其中CD83表達(dá)顯著上調(diào)(735％VS413％)：DC培養(yǎng)上

5、清IL12含量(pg／mL)較常規(guī)誘導(dǎo)組明顯升高(6326541426VS4428543896，P=0000)，且該組DC刺激淋巴細(xì)胞增殖作用增強(qiáng)；黃芪甲苷可使未成熟DC釋放exosome增加，并可促進(jìn)DC誘導(dǎo)的CTL對SMMC7721的特異性殺傷(％)(5998士523VS46504231，P=0002)，而對Dexo無明顯作用。結(jié)論1健康人外周血、臍血和肝癌病人術(shù)中失血來源單核細(xì)胞均可在體外誘導(dǎo)獲得具有典型形態(tài)和表型的成熟DC，用于

6、后續(xù)肝癌DC疫苗實驗研究；肝癌術(shù)中失血來源DC成熟度稍低，但有望通過體外誘導(dǎo)培養(yǎng)并添加促成熟因子提高肝癌患者DC成熟標(biāo)志物的表達(dá)，從而提高其免疫功能。2Dexo作為一種既攜帶腫瘤抗原又具有抗原提呈作用的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的增殖，誘發(fā)特異性殺傷效應(yīng)，此作用在DC參與下明顯增強(qiáng)，Dexo有可能完全或部分替代DC而發(fā)揮腫瘤疫苗或天然抗腫瘤佐劑的作用；Texo在體外不能單獨(dú)誘導(dǎo)初始T淋巴細(xì)胞活化增殖，但是在機(jī)體內(nèi)環(huán)境中仍然有可能發(fā)揮其免