CD137信號對CIK細(xì)胞增殖和功能調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、共刺激分子CD137是近年新發(fā)現(xiàn)的TNFR超家族的新成員，其主要表達(dá)在活化的T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(natural killer，NK cells)和樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)表面。研究發(fā)現(xiàn)CD137與其配體結(jié)合后，介導(dǎo)的共刺激信號可促進(jìn)T細(xì)胞和NK細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞因子的分泌以及減少活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(activation-induced cell death，AICD)，增加細(xì)胞存活能力。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)

2、胞(cytokineinduced killer cells，CIK細(xì)胞)是一種新型的具有廣譜殺瘤活性的非主要組織相容性復(fù)合物(non-major histocompatibility complex，MHC)限制性的免疫效應(yīng)細(xì)胞。但目前CIK細(xì)胞的擴(kuò)增效率和治療實(shí)體瘤的療效仍有待進(jìn)一步提高。CIK細(xì)胞為一群異質(zhì)細(xì)胞群，包括CD3+CD56+細(xì)胞和CD3+CD8+細(xì)胞，其中CD3+CD56+細(xì)胞是CIK細(xì)胞發(fā)揮直接和間接抗腫瘤作用最主要

3、的效應(yīng)細(xì)胞。因此通過提高CIK細(xì)胞中CD3+CD56+細(xì)胞的數(shù)量和抗腫瘤的活性可有效提高CIK細(xì)胞過繼免疫治療的療效。然而目前CD137信號對CD3+CD56+細(xì)胞亞群的功能調(diào)節(jié)國內(nèi)外未見報(bào)道。在本研究中，通過CD137mAb激活CD137共刺激信號通路，可以顯著提高CIK細(xì)胞的增殖能力和殺傷活性。在此基礎(chǔ)上，探討CD137信號對CIK細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為提高CIK細(xì)胞治療實(shí)體瘤的療效提供新的理論依據(jù)。 目的：探討C

4、D137信號對健康人和肺癌患者外周血來源的CIK細(xì)胞的擴(kuò)增和功能調(diào)節(jié)作用。 方法：分離健康人和肺癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral bloodmononuclear cells，PBMCs)，實(shí)驗(yàn)組在常規(guī)CIK培養(yǎng)體系中加入CD137單克隆抗體(monoclonal antibody，mAb)，即CD137-CIK組；對照組在常規(guī)CIK培養(yǎng)體系中加入鼠IgG1同型對照，即IgG1-CIK組。健康人CIK細(xì)胞：(1)苔盼

5、藍(lán)拒染法細(xì)胞計(jì)數(shù)分析細(xì)胞增殖；(2)LDH酶釋放法檢測CIK細(xì)胞對A549細(xì)胞殺傷活性：(3)AmexmV-FITC/PI試劑盒檢測CIK細(xì)胞凋亡率；(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測CIK細(xì)胞表型分布及CD3+CD56+細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子及其表面NK細(xì)胞受體(NK cell receptor,NKR)的表達(dá)；(5)CIK細(xì)胞和CD4+Th0細(xì)胞共培養(yǎng)后，流式細(xì)胞儀分析CD4+T細(xì)胞內(nèi)IFN-γ和IL-4的表達(dá)水平。肺癌患者CIK細(xì)胞：(1)流式細(xì)胞術(shù)分

6、析CIK細(xì)胞表型；(2)LDH酶釋放法檢測CIK細(xì)胞對A549細(xì)胞殺傷活性。 結(jié)論：CD137共刺激信號可有效的提高健康人和肺癌患者外周血中CIK細(xì)胞的擴(kuò)增效率并增強(qiáng)CIK細(xì)胞體外非MHC限制性殺傷腫瘤細(xì)胞的能力；同時(shí)CD137信號通過提高CD3+CD56+細(xì)胞分泌Th1類細(xì)胞因子的能力，促使CIK細(xì)胞誘導(dǎo)CD4+Th0細(xì)胞向Th4方向分化，從而實(shí)現(xiàn)輔助激活體內(nèi)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxie T lymphocyte，C