基于疏水化修飾羧甲基殼聚糖自組裝納米粒的制備及應(yīng)用.pdf

1、本論文利用1-乙基-3-(3-二甲基丙基)·碳二亞胺(1-ethy1-3-(3-dimethylaminopropyyl)-carbodiimide，EDC)介導(dǎo)反應(yīng)合成了亞油酸修飾羧甲基殼聚糖(1inoleic-acid modified carboxymethyl-chitosan，LCC)、葉酸修飾羧甲基殼聚糖(folate modified carboxymethyl-chitosan，F(xiàn)CC)兩種兩親性殼聚糖復(fù)合物，核磁共振圖

2、譜檢測并證明了產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。 通過超聲乳化的方法制備出納米微粒并檢測了納米微粒的性質(zhì)。利用芘作為熒光探針來研究水溶液中疏水微區(qū)的形成，測定了臨界聚集濃度，結(jié)果表明三種不同亞油酸取代度的LCC的臨界聚集濃度分別為0.061，0.072與0.081 mg/ml。激光粒度散射儀檢測結(jié)果顯示，LCC納米粒的平均粒徑為412nm，F(xiàn)CC納米粒的平均粒徑為268nm。通過透射電鏡觀察，納米粒呈球形，結(jié)構(gòu)完整。 納米?？梢宰鳛椴ぬ}蛋白酶

3、的載體。通過物理結(jié)合和化學結(jié)合兩種方法使酶負載于納米粒上。結(jié)果表明，菠蘿蛋白酶被固定化后，熱穩(wěn)定性及儲存穩(wěn)定性均有提高。這是因為酶和納米粒之間的多種作用(比如離子相互作用、氫鍵結(jié)合以及疏水作用力等)。固定化酶的Km值小于自由酶，表明固定化可以提高酶的穩(wěn)定性并加強酶與底物的親和力。原因可能是固定化過程對酶的構(gòu)象有影響；另外，納米粒與酪蛋白之間的電荷作用或疏水作用也加強了酶對底物的親和力。 作為抗腫瘤藥物阿霉素的藥物載體，檢測了不同

4、亞油酸取代度，不同初始藥物濃度對載藥量、包封率及體外釋藥特性的影響。結(jié)果表明，提高藥物初始濃度，納米粒的包封率降低，載藥量升高，藥物釋放速度加快；隨著亞油酸取代度增加，載藥量與包封率提高，藥物釋放速度減慢。主要因為納米粒中疏水結(jié)構(gòu)域與疏水藥物之間的強疏水作用，而且殼聚糖納米粒有剛性結(jié)構(gòu)和疏水的內(nèi)核，這一結(jié)構(gòu)將限制藥物的釋放。 進一步比較了兩種載阿霉素(DOX)納米粒LCC、FCC對腫瘤細胞(Hela)生長的抑制作用。3-(4，5

5、-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4，5-dimehyl-2-thiazolyl)-2，5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide，MTT)比色法表明，二者均表現(xiàn)出濃度、時間依賴性的腫瘤細胞生長的抑制作用。FCC-DOX比LCC-DOX具有更高的細胞生長抑制活性；在細胞對納米粒攝取的定性測定實驗中，細胞對FCC納米粒表現(xiàn)出更好的吞噬效果。通過熒光顯微鏡也觀察到納米粒通過細胞吞噬作用進入了細胞。這