大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞缺血心肌移植的時效性研究.pdf

1、目的：觀察在大鼠心肌梗塞后不同時期進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞缺血心肌移植，對大鼠的心功能和缺血心肌組織毛細(xì)血管新生作用的影響，以及移植細(xì)胞在宿主體內(nèi)存活、分化的情況，以探討心肌梗塞后細(xì)胞移植治療的最佳時間窗。 方法：將成年雄性近交系Wistar大鼠85只隨機分為假手術(shù)組(n=6)和建模組(n=79)。后者用結(jié)扎左冠狀動脈前降支的方法建立心肌梗塞模型。分別從心電圖、組織形態(tài)學(xué)、心功能(左室收縮壓、左室發(fā)展壓、±dp／dt<,msx>、心

2、率)方面對建模組動物和假手術(shù)組動物進(jìn)行比較，評估模型效果。隨后，將剩余的已成功建立心肌梗塞模型的54只大鼠隨機分成移植對照組(DMEM組，n=24)、細(xì)胞移植組(MSC組，n=24)、骨髓采集組(n=6)。無菌解剖骨髓采集組大鼠的股骨、脛骨和肱骨，常規(guī)抽取骨髓，分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)擴(kuò)增后制備細(xì)胞懸液。將已用熒光染料DAPI進(jìn)行過細(xì)胞核標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(O.15ml含1×10<'6>個細(xì)胞)分別于建模后1小時(MSC-1

3、組，n=8)、2周(MSC-2組，n=8)和4周(MSC-3組，n=8)，直接注射入細(xì)胞移植組動物梗死心肌組織邊緣區(qū)。移植對照組用同樣方法分別于建模后1小時(DMEM-1組，n=8)、2周(DMEM-2組，n=8)和4周(DMEM-3組，n=8)注射等量(O.15m1)培養(yǎng)液。所有MSC組和DMEM組動物于移植手術(shù)后4周處死，用免疫熒光法觀察移植細(xì)胞在體內(nèi)存活、分化情況，計算心梗邊緣區(qū)毛細(xì)血管密度，用RT-PCR．方法測定心梗邊緣區(qū)VE

4、GF的表達(dá)，用非循環(huán)式langendorff模型檢測左室血流動力學(xué)指標(biāo)(左室收縮壓、左室發(fā)展壓、±dp／dt<,max>)，評價心臟功能改善效果。 結(jié)果：用結(jié)扎左冠狀動脈前降支法建立心肌梗塞模型的大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，心電圖表現(xiàn)出明顯的ST-T改變和病理性Q波；組織切片HE染色可見大量心肌細(xì)胞壞死，心梗后數(shù)小時表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤為主，心梗后2周炎癥反應(yīng)逐漸減弱，纖維組織開始增生，心梗后4周表現(xiàn)為疤痕形成為主；血流動力學(xué)指標(biāo)(左

5、室收縮壓、左室發(fā)展壓、±dp／dt<,max>、心率)均有顯著性下降。分離純化的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞學(xué)方法鑒定表面標(biāo)志物為CD44+、CD29+、CD34-。MSC-1、2、3組均見移植細(xì)胞存活，并有部分移植細(xì)胞向心肌細(xì)胞發(fā)生分化，其中MSC-2組分化率顯著高于其它組。MSC-2、3N毛細(xì)血管密度，VEGF表達(dá)和左室血流動力學(xué)指標(biāo)(左室收縮壓、左室發(fā)展壓)與DMEM-2、3組相比有顯著提高，而MSC-1組和DMEM-1組間比較

6、差異無統(tǒng)計學(xué)意義。±dp／dt<,max>表現(xiàn)為MSC-1、2、3組均顯著高于DMEM-1、2、3N。MSC-1、2、3組比較，MSC-2組毛細(xì)血管密度，VEGF表達(dá)和左室血流動力學(xué)指標(biāo)(左室收縮壓、左室發(fā)展壓、±dp／dt<,max>)顯著高于其他兩組。 結(jié)論：采用左冠狀靜脈定位，結(jié)扎左冠狀動脈前降支的方法能成功、穩(wěn)定的建立大鼠心肌梗塞模型。與心梗后1小時和4周比較，選擇大鼠心肌梗塞后2周進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植，移植細(xì)胞向心