功能矯治大鼠下頜前伸后髁突軟骨iNOS表達的動態(tài)實驗研究.pdf

1、目的:功能矯治的最終效果一直是正畸工作者關注的重點之一,由于實驗方法、設計思路以及患者的配合程度的不同,其結(jié)果也不盡相同。學術界對其存在兩種不同的觀點,一部分學者認為功能矯治通過前伸下頜使肌肉應力發(fā)生改變,從而促進髁突的改建,影響整個下頜骨的生長發(fā)育進而改善Ⅱ類錯(牙合)的面型;另有部分學者認為功能矯治只是提前預支了下頜的最大生長量,最終不會產(chǎn)生明顯的骨骼作用。正常軟骨細胞能合成少量的NO,一定的力學刺激對軟骨細胞NO的生成有影響,而i

2、NOS是合成NO的主要影響因素之一。因此,本實驗通過研究功能矯治過程中大鼠髁突軟骨iNOS的表達變化,初步了解iNOS及NO在髁突改建過程中的作用同時通過iNOS的動態(tài)變化對功能矯治的穩(wěn)定性進行遠期的觀察,旨在為臨床工作提供實驗依據(jù)。
　　 方法:選擇60只4周齡健康Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,體重90g左右,常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)7天后隨機等量分為兩組:實驗組(S)和對照組(D),各30只。實驗組大鼠白天配戴自制的

3、可摘式上頜斜面導板矯治器10-12小時引導下頜向前。對照組大鼠不戴矯治器,為自然生長組。所有大鼠均自由飲水。實驗組大鼠自由飲食,對照組大鼠定時喂食,以保證兩組動物體重增加量相當。實驗周期分別為1周(1w)、2周(2w)、3周(3w)、4周(4w)、5周(5w)、6周(6w),按實驗周期每組隨機抽取大鼠5只斷頸處死,取右側(cè)髁突置于4％多聚甲醛中4℃固定24小時,蒸餾水沖洗后室溫下用10％的EDTA脫鈣,常規(guī)處理后石蠟包埋,髁突組織塊縱向切

4、片。石蠟切片經(jīng)HE染色后觀察髁突軟骨的組織學變化并測量不同實驗周期髁突軟骨的厚度;通過免疫組化染色應用Motic Med6.0數(shù)碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)(Motic Med6.0CMIAS)檢測不同實驗周期髁突軟骨不同部位iNOS的表達變化。
　　 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對所有數(shù)據(jù)進行處理,從而分析不同時間周期髁突軟骨厚度的變化以及iNOS在髁突軟骨中表達強度的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1組織學觀察
　　

5、 肉眼觀察:大鼠髁突前后徑大于內(nèi)外徑,髁突的前斜面較長,后斜面偏短。
　　 1.1對照組髁突軟骨的組織學特點
　　 鏡下可見一層纖維組織即關節(jié)盤包繞在髁突軟骨表面,對應于關節(jié)盤后帶略靠后部位的軟骨組織最厚,髁突軟骨由后向前逐漸變薄。髁突軟骨下方為骨小梁。伴隨著生長發(fā)育髁突軟骨的整體厚度逐漸變薄,出現(xiàn)增齡性變化。
　　 髁突軟骨具有獨特的層域化分帶,根據(jù)細胞形態(tài)不同可分為:①纖維層為含有成纖維細胞的致密的纖維組織

6、構(gòu)成②生發(fā)層有許多致密的小細胞組成,此層細胞比較活躍,可見有絲分裂相③成熟層此層細胞增大,形態(tài)不規(guī)則,排列不整齊,胞核多為于細胞的一側(cè),軟骨機制增多。④移行層此層細胞腫脹,胞核不明顯,軟骨基質(zhì)明顯增多,是軟骨細胞逐漸向骨細胞轉(zhuǎn)化的區(qū)域。
　　 1.2實驗組髁突軟骨的組織學特點
　　 功能矯治前伸大鼠下頜后髁突軟骨中后部的厚度增加,從實驗的第2周開始髁突軟骨的中部和后部與對照組相比有統(tǒng)計學差異,軟骨層增厚表現(xiàn)為生發(fā)層細胞數(shù)

7、增加,胞核大而明顯;成熟層較對照組也增厚,細胞形態(tài)與對照組相似。髁突軟骨前部的厚度從第1周到第5周與對照組相比沒有明顯的統(tǒng)計學差異,在第6周軟骨前部厚度與對照組相比變薄有明顯的統(tǒng)計學意義。觀察動物發(fā)現(xiàn)戴用矯治器一段時間后拆除矯治器,個別大鼠下頜習慣性前伸,出現(xiàn)前牙的反(牙合)。
　　 2免疫組化結(jié)果
　　 iNOS陽性表達為棕黃色,主要定位于胞漿。陽性細胞著色水平明顯高于背景水平,空白對照(PBS代替一抗)組未見陽性著色

8、顆粒。iNOS在大鼠髁突軟骨的全層均有表達,以成熟層淺層的軟骨細胞表達最強。iNOS的表達強度在髁突軟骨后部最強,其次為前部,中部表達最弱。
　　 2.1髁突軟骨前部iNOS的表達
　　 對照組和實驗組前部的表達趨勢同后部相同,從第2周到第4周iNOS表達的兩兩比較有顯著性差異。前伸大鼠下頜后前部表達水平也增強,從第1到第6周與對照組相比始終有顯著性差異。
　　 2.2髁突軟骨中部iNOS的表達
　　 對

9、照組和實驗組中部的表達趨勢也同后部相同。對照組從第2到第4周iNOS表達的兩兩比較有顯著性差異。前伸大鼠下頜后iNOS的表達在第1周,第2周時與對照組有顯著性差異,第3周到第4周與對照組相比無顯著性差異。
　　 2.3髁突軟骨后部iNOS的表達
　　 對照組中iNOS的陽性表達強度逐漸降低,呈現(xiàn)出增齡性變化,從第2周到第5周iNOS表達的兩兩比較有統(tǒng)計學意義;實驗組中iNOS的表達水平均高于對照組,其表達趨勢與對照組相同

10、,從第1到第5周iNOS表達與對照組相比有顯著性差異。實驗第6周iNOS的表達水平與對照組相比無顯著性差異。
　　 結(jié)論:
　　 1生長期大鼠髁突軟骨隨觀測時間的推移出現(xiàn)增齡性變化,軟骨厚度逐漸變薄;功能矯治后髁突軟骨表現(xiàn)為適應性改建,治療初期軟骨厚度明顯增厚并隨實驗進程逐漸變薄。
　　 2正常生理狀態(tài)下生長發(fā)育期大鼠髁突軟骨中有iNOS的表達,隨生長發(fā)育逐漸降低,提示iNOS參與髁突正常的生長發(fā)育過程。