花楸體細(xì)胞胚高頻誘導(dǎo)及萌發(fā)促進(jìn)的研究.pdf

1、花楸（Sorbus pohuashanensis），薔薇科花楸屬落葉小喬木，是我國北方特有的園林觀賞性樹種?；ㄩ斌w胚發(fā)生及植株再生的研究對(duì)花楸優(yōu)良無性系的大量快繁具有重要意義。本文針對(duì)花楸體胚誘導(dǎo)率和萌發(fā)率低的問題，通過對(duì)外植體進(jìn)行預(yù)處理的方法來提高花楸體胚的誘導(dǎo)率，同時(shí)采用掃描及透射電子顯微鏡觀察的方法跟蹤觀察花楸體胚發(fā)生過程中細(xì)胞的變化，并從細(xì)胞的角度分析了體胚高頻發(fā)生的原因;在此基礎(chǔ)上進(jìn)行次生胚的增殖和成熟的研究，找出促進(jìn)花楸體胚

2、萌發(fā)的重要影響因素，為花楸體細(xì)胞胚胎發(fā)生及植株再生體系的建立提供科學(xué)的理論依據(jù)。
　　(1)以花楸未成熟合子胚為外植體作為體胚誘導(dǎo)材料，選擇未經(jīng)任何預(yù)處理的外植體作為對(duì)照;使用1mol·L-1的甘露醇對(duì)外植體滲透預(yù)處理24h后，體胚的誘導(dǎo)率得到明顯的提高，并且體胚直接發(fā)生于外植體表面，說明甘露醇對(duì)外植體的滲透預(yù)處理有利于花楸體胚的發(fā)生。同時(shí)，通過掃描及透射電子顯微鏡對(duì)外植體進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比經(jīng)過預(yù)處理的外植體細(xì)胞內(nèi)部的變化從

3、培養(yǎng)初期就有巨大差異。子葉部位較對(duì)照有著明顯的變化，其邊緣的表面細(xì)胞不規(guī)則突起且細(xì)胞排列疏松，細(xì)胞內(nèi)部間隙變大且細(xì)胞壁明顯加厚，可能這種細(xì)胞上的變化有利于多細(xì)胞原胚的發(fā)生，為體胚的高頻率發(fā)生提供了保證。
　　(2)對(duì)已獲得的花楸體胚及體胚團(tuán)塊進(jìn)行增殖與成熟培養(yǎng)，在光照條件下，體胚在添加生長素萘乙酸的MS培養(yǎng)基上，接種密度為每皿30個(gè)體胚時(shí)，體胚的增殖效果最佳;花楸體胚的在黑暗條件下，以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并附加5％的蔗糖和200

4、mg·L-1水解酪蛋白，添加附加物聚乙二醇能夠有效的促使體胚成熟，對(duì)體胚進(jìn)行此成熟處理后體胚的成熟率可達(dá)59％。成熟的花楸體胚在形態(tài)上表現(xiàn)為乳白色或淺黃色不透明結(jié)實(shí)的子葉形體胚，長度大約4-5mm。
　　(3)選擇成熟較好的體胚進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，體胚經(jīng)過成熟培養(yǎng)35天后，將其接種于添加少量生長素和0.1％活性炭的MS萌發(fā)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，體胚的萌發(fā)率較高，并且體胚的兩片真葉發(fā)育正常且部分長出根。
　　總結(jié)以上分析可以得出結(jié)論，有效的