D2-40、VEGF-C在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的：食管癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其5年生存率與腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其中淋巴道轉(zhuǎn)移是食管癌最常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移途徑。研究表明，許多惡性腫瘤在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，均有新生淋巴管形成，這些新生淋巴管與惡性腫瘤早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及其不良預(yù)后密切相關(guān)。因此，探討食管癌淋巴道轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制，了解腫瘤轉(zhuǎn)移的生物學(xué)行為至關(guān)重要。 D2-40是新發(fā)現(xiàn)的特異性淋巴管標(biāo)志物，能特異地與淋巴管內(nèi)皮反應(yīng)，而不與血管內(nèi)皮反應(yīng)。因此，D2-40被廣泛地用于

2、標(biāo)記實(shí)體腫瘤組織中的淋巴管內(nèi)皮。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)家族的一個(gè)成員，是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的促淋巴管生長(zhǎng)因子，可與其受體VEGFR-3結(jié)合，誘導(dǎo)實(shí)體瘤內(nèi)或腫瘤周?chē)牧馨凸苌珊?或擴(kuò)張，促進(jìn)腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 為了進(jìn)一步探討食管癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制，本研究采用免疫組織化學(xué)染色法，檢測(cè)食管癌組織中D2-40和VEGF-C的表達(dá)情況，評(píng)估。D2-40和VEGF-C在食管癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的意義。 方

3、法: 1、病例選擇：所有資料均為邢臺(tái)市腫瘤醫(yī)院和邢臺(tái)市礦務(wù)局總醫(yī)院2004年11月～2006年10月手術(shù)切除、經(jīng)病理確診的食管鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本存檔蠟塊60例，術(shù)前均未行化療和放療。根據(jù)2000年新的食管腫瘤組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分類(lèi)，高分化鱗癌20例，中分化鱗癌14例，低分化鱗癌26例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。浸潤(rùn)深度分兩組，腫瘤浸潤(rùn)達(dá)粘膜層、粘膜下層或淺肌層者為淺層組，共9例，腫瘤浸潤(rùn)達(dá)深肌層或外膜者為深層組，共51

4、例。另選10例病理未發(fā)現(xiàn)異常的食管組織作為正常對(duì)照。 2、免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果判斷：采用免疫組化S-P法，分別檢測(cè)10例正常食管組織和60例食管鱗狀細(xì)胞癌石蠟包埋組織中D2-40、VEGF-C表達(dá)情況及淋巴管的分布特點(diǎn)。 2．1 D2-40陽(yáng)性結(jié)果判斷：D2-40陽(yáng)性免疫產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。凡染成棕黃色細(xì)顆粒狀，管壁由單層內(nèi)皮樣細(xì)胞構(gòu)成，均確認(rèn)為陽(yáng)性淋巴管。分別對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌組織腫瘤邊緣區(qū)(正常組織與腫

5、瘤交界區(qū))、中心區(qū)(實(shí)體腫瘤內(nèi)部)<'[3]>以及正常食管組織進(jìn)行計(jì)數(shù)。先在低倍鏡下(100×)觀察整張切片的淋巴管分布情況后，然后于高倍視野(400×)下每例計(jì)數(shù)3個(gè)視野的淋巴管數(shù)，取均值作為該病例的淋巴管密度(LVD)<'[4]>，以x±S/高倍視野值(x±S/HPF)表示。 2．2 VEGF-C陽(yáng)性結(jié)果判斷：VEGF-C陽(yáng)性免疫產(chǎn)物定為于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。參照Kinoshita<'[5]>等的判定標(biāo)準(zhǔn)，以組織中陽(yáng)性細(xì)胞

6、的比值進(jìn)行判斷，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10％為(-)，≥10％為(+)。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：在Excel中進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包，采用X<'2>檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和方差分析，LND以x±S表示。 結(jié)果: 1、D2-40在正常組織及食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)結(jié)果 1．1 D2-40在正常組織及食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況D2-40陽(yáng)性免疫產(chǎn)物為棕黃色顆粒，位于內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)。正常食管組織D2-40陽(yáng)性表達(dá)的

7、淋巴管主要位于粘膜下，分布稀疏；食管鱗狀細(xì)胞癌組織中D2-40陽(yáng)性淋巴管主要位于腫瘤邊緣區(qū)，淋巴管密集。 1．2正常食管組織和食管鱗狀細(xì)胞癌中的LVD 光鏡下計(jì)數(shù)淋巴管的密度，正常食管組織LVD為3.08±1.86/HPF，而食管鱗狀細(xì)胞癌為6.67±3.89/HPF，食管鱗狀細(xì)胞癌組織中淋巴管密度明顯高于正常食管組織(P<0.01)，提示食管鱗狀細(xì)胞癌組織中內(nèi)具有更豐富的淋巴管。 1.3食管鱗狀細(xì)胞癌不同區(qū)域L

8、VD的差異 免疫組化結(jié)果顯示，食管鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織不同區(qū)域D2-40陽(yáng)性表達(dá)的淋巴管密度和形態(tài)特點(diǎn)有一定差異，腫瘤邊緣區(qū)淋巴管密度明顯高于腫瘤中心區(qū)(P<0.01)，在形態(tài)上腫瘤邊緣區(qū)淋巴管多數(shù)呈擴(kuò)張狀態(tài)，而中心區(qū)的淋巴管很少擴(kuò)張。 1．4 LVD與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組LVD分別為9.09±2.52/HPF和7.07±2.20/HPF，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組LVD顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P

9、<0.01)。 1．5 LVD與食管鱗狀細(xì)胞癌其他臨床病理特征的關(guān)系食管鱗狀細(xì)胞癌中D2-40表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小、分化程度以及浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)。 2、VEGF-C在正常組織及食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況 10例正常食管組織未見(jiàn)VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)。食管鱗狀細(xì)胞癌組織中，癌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)，但以癌細(xì)胞為主。60例食管鱗狀細(xì)胞癌VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率為55.00％，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組病例中VEGF

10、-C陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(71.43％vs 40.63％，P<0.05)。在高分化、中分化、低分化組VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率分別為30.00％、57.14％和73.08％，隨著腫瘤分化程度降低VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率逐步增高(P<0.05)。深層浸潤(rùn)組VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率為62.75％，明顯高于淺層浸潤(rùn)組的11.11％(P<0.05)。VEGF-C表達(dá)與患者的年齡以及腫瘤大小無(wú)關(guān)。 3 食管鱗狀細(xì)胞癌組織中VEGF-

11、C表達(dá)與LVD的相關(guān)性 33例VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)的食管鱗狀細(xì)胞癌組織中，其LVD為8.26±4.24/HPF，而VEGF-C陰性表達(dá)的病例LVD為4.17±4.11/HPF，明顯低于VEGF-C陽(yáng)性組(P<0.01)，提示食管鱗狀細(xì)胞癌組織中VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)與LVD相關(guān)。 結(jié)論: 1、正常食管組織和食管鱗狀細(xì)胞癌組織中均可見(jiàn)D2-40陽(yáng)性表達(dá)的淋巴管，但食管鱗狀細(xì)胞癌組織中淋巴管密度明顯高于正常食管組織。說(shuō)

12、明食管鱗狀細(xì)胞癌組織中具有更豐富的淋巴管。 2、食管鱗狀細(xì)胞癌邊緣區(qū)淋巴管密度>中心區(qū)，且邊緣區(qū)淋巴管多數(shù)呈擴(kuò)張狀態(tài)，而中心區(qū)的淋巴管很少擴(kuò)張；食管鱗狀細(xì)胞癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組LVD明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。提示食管鱗狀細(xì)胞癌邊緣區(qū)淋巴管的密度和形態(tài)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。D2-40的陽(yáng)性表達(dá)對(duì)于判斷食管鱗癌的預(yù)后有重要的參考價(jià)值。 3、VEGF-C在正常組織中無(wú)表達(dá)，食管鱗狀細(xì)胞癌組織呈高表達(dá)：食管鱗癌中VEGF-C的表達(dá)與L