上轉(zhuǎn)換納米介導(dǎo)的光動(dòng)力療法體外殺傷脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討以上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒為載體與光敏劑部花青540連接的納米復(fù)合物(UCNPs-MC540)介導(dǎo)的光動(dòng)力對(duì)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外殺傷效應(yīng)。
　　方法:(1)于無(wú)菌條件下體外分離新生1-2天的SD大鼠脊髓組織，制成細(xì)胞懸液，通過(guò)差速貼壁和恒溫?fù)u床震蕩去除雜細(xì)胞，進(jìn)行傳代、培養(yǎng)。利用膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞。(2)成功分離提純大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞后，采用MTT法檢測(cè)不同濃度UCNPs

2、-MC540復(fù)合物，不同能量980納米波長(zhǎng)近紅外激光照射對(duì)細(xì)胞活力的影響以及UCNPs-MC540聯(lián)合980納米近紅外激光的光動(dòng)力療法的細(xì)胞殺傷效應(yīng);最后用透射電鏡觀察在200μg/ml UCNPs-MC540復(fù)合物濃度與近紅外980納米激光2000J/cm2能量照射下，星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變。
　　結(jié)果:(1)體外分離培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)，膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色陽(yáng)性，證實(shí)為星形膠質(zhì)細(xì)胞。(

3、2)在不同濃度UCNPs-MC540(0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)后，細(xì)胞存活率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);不同能量(0J/cm2、200 J/cm2、500 J/cm2、1000 J/cm2、2000 J/cm2)980納米近紅外激光照射體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞后，細(xì)胞存活率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);不同濃度UCNPs-MC540與星形膠質(zhì)細(xì)胞共

4、培養(yǎng)12小時(shí)后給予2000J/cm2980納米近紅外激光照射，細(xì)胞存活率隨著UCNPs-MC540濃度的增加而降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在UCNPs-MC540濃度為100μg/ml與細(xì)胞共培養(yǎng)12小時(shí)后分別給予不同能量激光照射，隨著激光劑量的增加，細(xì)胞存活率下降，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)與空白對(duì)照組相比，在濃度為200μg/mlUCNPs-MC540復(fù)合物介導(dǎo)的光動(dòng)力作用下，細(xì)胞呈現(xiàn)典型的凋亡樣改變

5、，線粒體受累，染色質(zhì)凝聚邊移，胞膜皺縮等改變。
　　結(jié)論:(1)新生SD大鼠的脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞成功在體外分離，培養(yǎng)，傳代及鑒定。(2)以上轉(zhuǎn)換熒光納米為載藥體，聯(lián)合光敏劑部花青540構(gòu)建的納米復(fù)合物UCNPs-MC540介導(dǎo)的光動(dòng)力療法對(duì)脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞具有一定的體外殺傷效果，為今后脊髓損傷后抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生，減少膠質(zhì)瘢痕形成的治療拓展了新的思路和方法。單純給予納米光敏復(fù)合物或單純進(jìn)行光照則無(wú)細(xì)胞殺傷效果，在一定程度上提示U