大蒜素對(duì)caco-2細(xì)胞膽固醇排出及ABCG5-ABCG8表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　探討大蒜素對(duì)載脂蛋白E基因敲除小鼠小腸以及Caco-2細(xì)胞膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)影響,闡明大蒜素的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用機(jī)制。
　　方法：
　　48只6周齡雄性apoE-/-小鼠，體重(20.1±1.6) g，隨機(jī)分為四組，每組各12只：Ⅰ普食組(正常飼料喂養(yǎng)，PBS0.1ml/2d，腹腔注射)，Ⅱ高脂高膽固醇組(高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)，PBS0.1ml/2d，腹腔注射)，Ⅲ高脂高膽固醇+大蒜素組(高脂高膽固醇

2、飼料喂養(yǎng)，大蒜素0.1ml/2d，腹腔注射)，Ⅳ普食+大蒜素組（正常飼料喂養(yǎng)，大蒜素0.1ml/2d，腹腔注射），其中的高脂飼料為正常飼料加2％膽固醇和10%豬油。12周后，所有小鼠經(jīng)20%烏拉坦0.2～0.3 ml腹腔麻醉，摘除眼球取血，采用氧化酶法測(cè)定apoE-/-小鼠血清中三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprot

3、ein cholesterol，HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)含量。石蠟切片 HE染色檢測(cè) apoE-/-小鼠主動(dòng)脈根部橫切面動(dòng)脈粥樣硬化病變。免疫熒光檢測(cè)小鼠小腸中ABCG5和ABCG8的表達(dá)。RT-PCR和Western Blot分別檢測(cè)小鼠小腸組織中ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白表達(dá)。Caco-2細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)傳代分為四組：ⅠCaco-2細(xì)

4、胞對(duì)照組，ⅡCaco-2細(xì)胞模型組Ⅲ，Caco-2細(xì)胞模型+大蒜素處理組，ⅣCaco-2細(xì)胞+大蒜素處理組。加相應(yīng)的處理因素處理后，高效液相色譜法測(cè)量細(xì)胞內(nèi)膽固醇和膽固醇酯含量，油紅 O染色觀察細(xì)胞內(nèi)的脂滴，RT-PCR和Western Blot分別檢測(cè)細(xì)胞中ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　高脂高膽固醇組小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平均高于普食組，高脂高膽固醇+大蒜素組的TC、T

5、G、以及LDL-C的水平均顯著低于高脂高膽固醇組，HDL-C有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；普食+大蒜素組的TC、TG、LDL-C均低于普食組，且差異有顯著性（p<0.05）。高脂高膽固醇+大蒜素組、高脂高膽固醇組分別與普食+大蒜素組、普食組之間進(jìn)行對(duì)比顯示，小鼠主動(dòng)脈竇斑塊面積前者相應(yīng)的低于后者，且存在顯著差異性（p<0.05）。組織免疫熒光、Western Blot和RT-PCR顯示，載脂蛋白E基因敲除小鼠高脂高膽固醇+大蒜素組和普食+

6、大蒜素組ABCG5和ABCG8蛋白和mRNA表達(dá)分別高于高脂高膽固醇組和普食組，Caco-2細(xì)胞模型+大蒜素處理組和 Caco-2細(xì)胞+大蒜素處理組的ABCG5和ABCG8蛋白和mRNA分別顯著高于Caco-2細(xì)胞模型組和Caco-2細(xì)胞對(duì)照組(p<0.05或p<0.01)，Caco-2細(xì)胞油紅O染色顯示加大蒜素處理組的脂質(zhì)沉積均相應(yīng)的低于沒有加大蒜素處理的組，進(jìn)一步的高效液相色譜測(cè)定結(jié)果顯示，加大蒜素處理的細(xì)胞中總膽固醇含量明顯降低(