大鼠缺血再灌注腎損傷中的TRX2表達(dá)與川穹嗪的干預(yù)作用.pdf

1、目的：觀察大鼠缺血再灌注(I/R)腎損傷術(shù)后硫氧還蛋白-2(TRX2)在腎組織的表達(dá)部位及強(qiáng)度變化。觀察川穹嗪在I/R腎損傷模型中對(duì)大鼠腎組織TRX2表達(dá)的影響。
　　方法：選取清潔級(jí)SD(Sprague-Dawley)雄性大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，重200～250克，36只。隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組與川穹嗪組（給藥組），各組12只。川穹嗪組（給藥組）:術(shù)前30min腹腔注射2％鹽酸川穹嗪注射液(40mg/kg)，術(shù)后每6小時(shí)腹腔注射給藥一

2、次。采取切除大鼠右腎后通過(guò)夾閉左側(cè)腎動(dòng)脈45min再恢復(fù)腎內(nèi)血液灌注方式來(lái)建立I/R腎損傷模型。模型組模用2ml/kg生理鹽水代替給藥，余操作同給藥組。假手術(shù)組:在切除右腎后僅單純游離左側(cè)腎動(dòng)脈，但不夾閉，余操作與模型組相同。各組大鼠根據(jù)術(shù)后再灌注時(shí)間不同隨機(jī)分為2個(gè)亞組，各亞組6只，分別于術(shù)后6h和術(shù)后24 h后取血并處死動(dòng)物，采集腎組織標(biāo)本。采用全自動(dòng)生化分析法檢測(cè)血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)值;在光鏡(LM)觀察腎組織病理

3、變化，用原位TUNEL熒光法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)TRX2在腎組織的表達(dá)部位及分布，用Western Blotting定量檢測(cè)腎組織中TRX2蛋白的表達(dá)強(qiáng)度。
　　結(jié)果：
　　1、腎功能的改變:
　　與假手術(shù)組術(shù)后6h比較，模型組術(shù)后6h大鼠血肌酐及尿素氮值有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與假手術(shù)組術(shù)后24h比較，模型組術(shù)后24 h大鼠血肌酐及尿素氮明顯升高，Scr113.2±93.3μmol/

4、L VS34.7±4.0μmol/L;BUN34.2±17.2 mmol/L VS11.4±2.9mmol/L，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均＜0.01）。與模型組術(shù)后6h比較，給藥組術(shù)后6h大鼠血肌酐及尿素氮值均下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組術(shù)后24h比較，給藥組術(shù)后24 h大鼠血肌酐及尿素氮明顯下降，Scr32.0±4.1μmol/L VS113.2±93.3μmol/L; BUN11.5±3.3 mmol/LVS34.2±

5、17.2mmol/L，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均＜0.01）。
　　2、光鏡下大鼠腎組織病理表現(xiàn):
　　與假手術(shù)組比較，同時(shí)間點(diǎn)模型組術(shù)后大鼠均存在不同程度的腎小管損傷，包括腎小管上皮細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核固縮，彌漫性刷狀緣脫落，基底膜裸露，管腔擴(kuò)大，偶見間質(zhì)水腫及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，而腎小球內(nèi)固有細(xì)胞、腎內(nèi)小血管內(nèi)皮細(xì)胞均未見明顯損傷。與模型組術(shù)后6h比較，模型組術(shù)后24h大鼠腎組織損傷更明顯，可見腎皮髓交界區(qū)的遠(yuǎn)端腎小管上皮細(xì)胞大片狀

6、凋亡、壞死，脫落至管腔，大量管型形成。與模型組比較，同時(shí)間點(diǎn)給藥組術(shù)后大鼠腎小管病理?yè)p傷均明顯減輕。
　　3、原位TUNEL免疫熒光法顯示:與假手術(shù)組比較，同時(shí)間點(diǎn)模型組術(shù)后大鼠腎組織凋亡細(xì)胞增多，在模型組術(shù)后24h大鼠腎組織凋亡細(xì)胞最明顯。與模型組比較，同時(shí)間點(diǎn)給藥組術(shù)后大鼠腎組織凋亡細(xì)胞減少。
　　5、免疫組化檢測(cè)TRX2的表達(dá):假手術(shù)組可見大鼠腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)及腎皮髓交界區(qū)腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)均有TRX2表達(dá)，其中以皮髓

7、交界區(qū)為著，而腎小球固有細(xì)胞、腎內(nèi)小血管內(nèi)皮細(xì)胞、髓襻均未見TRX2表達(dá)。模型組術(shù)后TRX2表達(dá)部位也在腎皮質(zhì)、髓質(zhì)及皮髓交界區(qū)的腎小管細(xì)胞內(nèi)，但髓質(zhì)區(qū)腎小管內(nèi)TRX2的表達(dá)變?nèi)酰砜梢姷接斜磉_(dá)TRX2的腎小管細(xì)胞脫落至小管腔內(nèi)。在給藥組術(shù)后6h和24h，均可見TRX2在腎皮質(zhì)、髓質(zhì)及皮髓交界區(qū)的腎小管細(xì)胞內(nèi)廣泛表達(dá)。
　　6、Western Blotting檢測(cè)TRX2的表達(dá):與假手術(shù)組術(shù)后6h比較，模型組術(shù)后6h大鼠腎組織TR

8、X2的表達(dá)輕度增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與假手術(shù)組術(shù)后24h比較，模型組術(shù)后24h大鼠腎組織TRX2表達(dá)明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組術(shù)后6h比較，模型組術(shù)后24h大鼠腎組織TRX2的表達(dá)明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組術(shù)后6h比較，給藥組術(shù)后6h大鼠腎組織TRX2表達(dá)未見明顯變化。與模型組術(shù)后24h比較，給藥組術(shù)后24h大鼠腎組織內(nèi)TRX2蛋白表達(dá)有增加趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）

9、。
　　結(jié)論：
　　1.TRX2廣泛表達(dá)于大鼠腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)及腎皮髓交界區(qū)的腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，腎小球固有細(xì)胞、腎內(nèi)小血管內(nèi)皮細(xì)胞、髓襻細(xì)胞均未見TRX2表達(dá)。
　　2.在I/R腎損傷術(shù)后的早期，大鼠腎組織內(nèi)TRX2的表達(dá)輕度升高，隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)，部分表達(dá)TRX2的腎小管細(xì)胞凋亡脫落至管腔內(nèi)，腎組織內(nèi)TRX2的表達(dá)強(qiáng)度下降。
　　3.川穹嗪被證實(shí)對(duì)大鼠I/R腎損傷有保護(hù)作用。
　　4.川穹嗪對(duì)I/R