農(nóng)桿菌介導iaaM基因創(chuàng)造單性結(jié)實酸漿種質(zhì)資源.pdf

1、本文研究通過農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化iaaM基因，使iaaM基因在酸漿果實中特異表達，提高果實中生長素濃度，創(chuàng)造遺傳穩(wěn)定的酸漿單性結(jié)實品種，為酸漿單性結(jié)實育種提供了新的種質(zhì)資源．本研究獲得的主要結(jié)果如下： 1、以MS為基本培養(yǎng)基，采用TDZ、6-BA、NAA等多種激素不同配比的組合，同時對酸漿的外植體篩選、再生芽的伸長和生根進行了研究。經(jīng)過對比試驗，確定了最佳再生體系。篩選出酸漿高效的再生培養(yǎng)基為：MS+TDZ1.0mg/L+NAA0.5

2、mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂8g/L；生根培養(yǎng)基為MS+NAA0.5 mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂8g/L，生根苗移栽存活率達到90％以上。同時還研究了不同的外植體類型、外植體種類以及激素濃度對再生的影響，發(fā)現(xiàn)葉片是最佳的外植體，TDZ對酸漿的誘導有很大的影響，并且不同基因型對，TDZ濃度的響應(yīng)不同。 2、本試驗明確了不同酸漿品種不定芽分化及生根培養(yǎng)分別用以篩選轉(zhuǎn)化植株的卡那霉素濃度，并通過侵染試驗對比轉(zhuǎn)化率，建立農(nóng)桿菌侵染

3、苦職葉片的遺傳轉(zhuǎn)化受體體系：70mg/L的Km是苦職葉片外植體篩選培養(yǎng)的臨界耐受濃度，20mg/L Km是苦職生根篩選培養(yǎng)的臨界濃度;培養(yǎng)基中濃度為350mg/L的頭孢霉素能夠很好的抑制農(nóng)桿菌的生長，且對葉片外植體的再生率和不定芽影響最小，可作為苦職的抑菌性抗生素。 3、在建立苦職遺傳受體體系的基礎(chǔ)上，通過GUS組織染色法研究了影響轉(zhuǎn)化效果的各因子，建立高效苦職的遺傳轉(zhuǎn)化體系：以預(yù)培養(yǎng)24h的苦職葉片為轉(zhuǎn)化材料，用OD600為0

4、.6的攜帶有iaaM基因的農(nóng)桿菌菌液侵染8min，24℃接種在附加100gmol/L乙酰丁香酮、pH為5.4的共培養(yǎng)基上共培養(yǎng)2d，五正遲培養(yǎng)2d，用選擇壓為70mg/L的Km連續(xù)篩選直至不定芽生成，待不定芽長至1cm左右時轉(zhuǎn)入附加20mg/LKm的生根培養(yǎng)基中，繼續(xù)篩選，并對生根抗性植株進行了PCR和Southern blotting檢測，其中28.2％的被檢植株產(chǎn)生Southem雜交信號，證明iaaM基因已整合到苦職基因組中，外源基