一條肺癌耐藥相關(guān)新基因LCCSG的全長(zhǎng)克隆與功能初步鑒定.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文一條肺癌耐藥相關(guān)新基因LCCSG的全長(zhǎng)克隆與功能初步鑒定姓名：陳永鋒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（呼吸系?。┲笇?dǎo)教師：楊和平20091101第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文8步探討該基因與肺癌MDR的關(guān)系，為進(jìn)一步研究該基因的生物學(xué)功能以期尋找新的逆轉(zhuǎn)耐藥途徑提供基礎(chǔ)。方法1.以已知的466bp為模板，應(yīng)用cDNA末端快速擴(kuò)增（rapidamplificationofcDNAends，RACE）技術(shù)獲取該新基因的全長(zhǎng)克

2、隆，利用生物信息學(xué)技術(shù)進(jìn)行新基因的染色體定位與二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)，并登錄GenBank（locusFJ159850）將該新基因命名為L(zhǎng)CCSG基因。2.采用半定量RTPCR檢測(cè)LCCSGmRNA在非小細(xì)胞肺癌及其他多種組織、細(xì)胞系中的表達(dá)分布情況。3.構(gòu)建反義表達(dá)載體人pAdEasyLCCSG重組腺病毒，感染NCIH446CDDP細(xì)胞后，觀察LCCSGmRNA表達(dá)抑制程度；觀察抑制LCCSG表達(dá)后NCIH446CDDP對(duì)多種化療藥物耐藥性的

3、變化，以及對(duì)多個(gè)多藥耐藥相關(guān)基因（MRP1、GST、TopoαⅡ、MDR1）mRNA及蛋白表達(dá)的影響，初步探討其耐藥機(jī)制。結(jié)果結(jié)果1獲取了該新基因的955bp的cDNA全長(zhǎng)序列，通過與互聯(lián)網(wǎng)上人類基因組序列的比對(duì)，其中920bp完全一致，初步驗(yàn)證了RACE結(jié)果的可靠性。2采用半定量RTPCR的方法檢測(cè)LCCSGmRNA在多種組織、細(xì)胞系中的表達(dá)結(jié)果顯示：⑴LCCSG在非小細(xì)胞肺癌的癌組織、癌旁組織及正常組織中均有表達(dá)，并且各組之間無明顯

4、表達(dá)差異；LCCSG的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的病理類型、分化程度和TNM分期無相關(guān)性。⑵LCCSG在食道癌、胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌和腎透明細(xì)胞癌的癌組織、癌旁組織及正常組織中也均有表達(dá)，并且各組之間無明顯表達(dá)差異。⑶LCCSG在耐藥細(xì)胞NCIA549CDDP、NCIH446CDDP中的表達(dá)均顯著強(qiáng)于其親代細(xì)胞（p0.01）。3.應(yīng)用AdEasy復(fù)制缺陷型腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建人LCCSG反義重組腺病毒，感染耐藥細(xì)胞NCIH4