野生稻特異基因的克隆及功能的初步鑒定.pdf

1、水稻是世界各國特別是亞洲國家的主要糧食作物。稻谷的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)優(yōu)品質(zhì)，一直是研究者致力的目標。水稻的抗病蟲性、抗逆性和強再生能力、細胞質(zhì)雄性不育以及功能葉耐衰老、矮稈、早熟、大柱頭、大粒等優(yōu)異特性都是達成該目標不可或缺的保障。挖掘控制這些優(yōu)異性狀的基因應用于水稻育種，是當前解決糧食問題的關鍵。普通野生稻保存著栽培稻中不具有或者在人工馴化過程中消失掉了的優(yōu)異基因。本研究旨在篩選普通野生稻所特有的基因，分析其控制的性狀，尋找應用于水稻生產(chǎn)的實用

2、價值。
　　 將中國科學院國家基因研究中心克隆并精確測序了的普通野生稻材料（O.rufipogon）W1943全長cDNA克隆分別與NCBI數(shù)據(jù)庫中典型粳稻日本晴和典型秈稻93-11的cDNA克隆序列進行比對，搜集到了67段W1943具有而日本晴和93-11中無任何已知表達序列的同源cDNA克隆作為普通野生稻特有基因的備選基因庫。本研究分別以這67段cDNA序列為模版設計引物，在33個栽培稻和普通野生稻材料的全長cDNA序列中進

3、行PCR擴增，經(jīng)測序驗證得到了1個普通野生稻特有基因。
　　 通過基因克隆，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法，把篩選到的特異基因?qū)胫谢?11栽培稻，對T0代轉(zhuǎn)基因植株與野生型對照進行半定量PCR分析，結果顯示該基因在轉(zhuǎn)基因水稻根、莖、葉中都過量表達，并且在葉中表達量最高，而野生型對照中均無表達現(xiàn)象。中花-11轉(zhuǎn)基因植株T1代苗三葉期比野生型苗同時期在形態(tài)學上表現(xiàn)為植株更加高大。同時測得該基因遺傳轉(zhuǎn)化植株的T1代苗該時期的葉綠素含量、脯氨酸含