2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:
  肝纖維化(Hepatic Fibrosis,HF)是肝臟對各種損傷因子的創(chuàng)傷愈合反應,以細胞外基質(Extra Celluar matrix,ECM)過度沉積為病理特征,是各種慢性肝病共有的病理過程。大量的動物實驗和臨床實驗研究表明,肝纖維化是一個可逆轉的病理過程。然而,目前臨床上缺乏確切有效的抗肝纖維化藥物及治療方法。所以,尋找有效逆轉肝纖維化的藥物是目前保肝藥物研究的熱點。而我國中草藥在抗肝纖維化療效方面具有良

2、好的藥理活性。
  甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)入藥已有悠久歷史。早在二千多年前,《神農本草經》就將其列為藥之上乘。南朝醫(yī)學家陶弘景將甘草尊為“國老”,并言:“此草最為眾藥之王,經方少有不用者”。“國老”,即帝師之稱。把甘草推崇為藥之“帝師”,其原因正如李時珍在《本草綱目》中所釋:“諸藥中甘草為君,治七十二種乳石毒,解一千二百草木毒,調和眾藥有功,故有‘國老’之號”?,F(xiàn)代中醫(yī)認為,甘草性平,味甘

3、,歸十二經,有解毒等諸多藥理作用?,F(xiàn)代藥理學研究表明,甘草及其富含的活性成分具有保肝和抗肝纖維化的作用。
  寧夏甘草的栽培技術已獲成功,種植面積達5萬余畝。在形成圍欄保護面積達40萬余畝的豐富資源優(yōu)勢同時,一方面,對寧夏人工栽培甘草在化學成份、質量分析方面進行了大量的研究工作;另一方面,結合產業(yè)化要求,制訂了相關的質量標準和(總)黃酮成份的提取工藝標準。
  本研究根據(jù)以甘草黃酮(Licorice Flavonoids,L

4、F)為研究對象,采用硫代乙酰胺(Thioacetamide,TAA)誘導的肝纖維化大鼠為實驗模型,明確甘草黃酮的抗肝纖維化作用,研究其保肝作用相關分子機制的同時,以期為甘草的開發(fā)、利用提供可靠的藥理學研究。
  實驗目的:
  1.復制硫代乙酰胺誘導的大鼠肝纖維化動物模型,通過血液生化法、組織病理學方法,觀察肝功能相關生化指標、肝纖維化相關病理指標,研究甘草黃酮對實驗動物肝纖維化的干預作用;
  2.通過分子生物學方法

5、觀察甘草黃酮對轉化生長因子-β1(TGF-β1)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表達水平及TGF-β1的mRNA水平的影響,探討甘草黃酮抗肝纖維化的可能作用機理。
  實驗方法:
  將84只雄性SD大鼠,隨機分為7組。模型組給予腹腔注射(ip)硫代乙酰胺(150mg/kg),每周2次,連續(xù)12周復制肝纖維化模型;陰性對照組給予正常的飼養(yǎng),同法給予生理鹽水;陽性對照組給予硫代乙酰胺的同時,給予的水飛薊素(silym

6、arin;30mg/kg),灌胃給藥進行干預;甘草黃酮各組在給予硫代乙酰胺同時,給予不同劑量(50mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg)的甘草黃酮進行干預。第12周末大鼠禁食不禁水12小時。稱重后,行45mg/kg戊巴比妥鈉(pentobarbital sodium)ip麻醉,心尖取血,分離血清。采用生化法檢測血清中ALT、AST、ALP、HA的含量,肝組織中HYP的含量;HE、Masson染色觀察肝纖

7、維化的形成以及免疫組織化學法測量TGF-β1和Caspase-3蛋白含量,qRT-PCR方法檢測TGF-β1的mRNA表達。
  實驗結果:
  1.肝功能及肝纖維化相關的生化指標結果:
 ?。?)硫代乙酰胺誘導的模型組與正常對照組相比,血清中AST、ALT、ALP、HA、以及肝組織中HYP的活性明顯升高。說明肝纖維化形成,肝功能受損,模型成功建立;
 ?。?)甘草黃酮各組與水飛薊素干預組血清中AST、ALT、A

8、LP、HA及肝組織中HYP含量較模型組顯著降低(P<0.01),說明甘草黃酮及水飛薊素在本次實驗條件下,具有對抗硫代乙酰胺誘導大鼠肝纖維化的形成、保護肝功能的作用。
  2.HE染色結果:
 ?。?)在大體觀察下,模型組大鼠肝臟體積增大,重量增加。表面不光滑,有大小不等的顆粒狀外觀,并出現(xiàn)周圍組織廣泛粘連。說明肝纖維化造模成功;
  (2)鏡下HE染色觀察,模型組肝小葉結構紊亂,中央靜脈周圍的肝細胞變性,周邊肝細胞脂肪

9、變,間質細胞大量彌漫增生。說明纖維組織增生明顯,形成肝纖維化,造模成功;
 ?。?)甘草黃酮各組及水飛薊素組與模型組比較,肝纖維化形成得到明顯抑制,顯示較好的干預效果。且甘草黃酮400mg/kg劑量組與水飛薊素組優(yōu)于其他各組。說明甘草黃酮具有對抗硫代乙酰胺誘導大鼠肝纖維化的形成、保護肝功能的作用。
  3.Masson染色結果:
 ?。?)模型組匯管區(qū)見大量膠原纖維產生,膠原纖維構成的纖維間隔形成,肝臟組織膠原纖維增生

10、程度與正常對照組比較明顯增多(P<0.01);
 ?。?)甘草黃酮400mg/kg組與模型組相比肝組織肝小葉結構完整,肝細胞變性壞死和纖維組織增生程度明顯減輕(P<0.05,P<0.01),甘草黃酮400mg/kg組療效要優(yōu)于其他各組。說明甘草黃酮具有對抗硫代乙酰胺誘導大鼠肝纖維化的形成、保護肝功能的作用;
 ?。?)水飛薊素組膠原纖維的形成程度與模型組相比較顯著降低(P<0.05),且甘草黃酮的作用與水飛薊素的作用相當(P

11、>0.05)。
  4.對肝臟TGF-β1蛋白表達的影響:
 ?。?)TGF-β1蛋白在正常肝組織中僅弱表達;
  (2)模型組較正常組TGF-β1蛋白表達明顯增多(P<0.01);
 ?。?)甘草黃酮各組TGF-β1蛋白的表達較模型組明顯減少(P<0.01),甘草黃酮400mg/kg劑量組作用最為明顯(P<0.01);
 ?。?)水飛薊素組大鼠肝臟TGF-β1蛋白表達較模型組明顯降低(P<0.01);甘草

12、黃酮組與水飛薊素組相比較沒有差別(P>0.05)。
  5.對肝臟Caspase-3蛋白表達的影響:
 ?。?)模型組Caspase-3蛋白的表達較正常對照組明顯增高(P<0.01);
 ?。?)甘草黃酮各組及水飛薊素組Caspase-3蛋白表達較模型組明顯減少(P<0.01),甘草黃酮400 mg/kg劑量組作用最為明顯;甘草黃酮組與水飛薊素組比較沒差別(P>0.05)。
  6.對TGF-β1的mRNA表達的

13、影響:
  (1)模型組TGF-β1的mRNA的表達較正常對照組比較明顯升高(P<0.01);
 ?。?)甘草黃酮組TGF-β1的mRNA的表達較模型組明顯降低(P<0.01),甘草黃酮400 mg/kg劑量組作用最為明顯;
 ?。?)水飛薊素組TGF-β1的mRNA的表達較模型組明顯降低(P<0.01)。甘草黃酮組與水飛薊素組比較沒差別(P>0.05)
  實驗結論:
  1.甘草黃酮具有抗硫代乙酰胺誘導

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