低氧對(duì)人肺腺癌細(xì)胞SPCA-1低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α和HIF-2α的差異性調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　研究低氧是否可在人肺腺癌細(xì)胞SPCA-1誘導(dǎo)HIF-2α的基因表達(dá),低氧對(duì)HIF-2α的調(diào)控作用,低氧對(duì)HIF-2α和HIF-lα的調(diào)控差異及其原因。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞系SPCA-1細(xì)胞在常氧、低氧條件下培養(yǎng)不同時(shí)間,采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)低氧對(duì)HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通過加入線粒體活性氧族阻斷劑魚藤酮、二亞苯基碘鎓和粘噻唑菌醇來探討低氧對(duì)HIF

2、-2α和HIF-lα蛋白的表達(dá)情況,探討其表達(dá)調(diào)控的機(jī)理。
　　結(jié)果：
　　(1)正常氧條件下,SPCA-1整細(xì)胞提取物和細(xì)胞核提取物中,HIF-1α表達(dá)量幾乎不表達(dá),HIF-2α在整細(xì)胞提取物中有少量表達(dá),但在細(xì)胞核提取物中無明顯表達(dá),當(dāng)SPCA-1細(xì)胞經(jīng)低氧(0.5％O2)處理4h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明顯增多。
　　(2)常氧條件下細(xì)胞密度越低,HIF-2α和HIF-1α蛋白均顯著減少。當(dāng)氧濃度下降

3、到3%以下時(shí),HIF-2α和HIF-1α蛋白就有顯著的增加。
　　(3)HIF-1α蛋白在低氧4h后增加,6h后含量顯著降低,12h后降低至對(duì)照組0h的水平。HIF-2α蛋白在低氧4h時(shí)增加,但在4~12h內(nèi)無明顯差異。HIF-2α和HIF-1α mRNA在低氧4h后無明顯變化。但隨著低氧時(shí)間的延長,低氧可明顯改變HIF-1α和HIF-2αmRNA的表達(dá), HIF-1αmRNA水平在低氧狀態(tài)時(shí)從6h到12h時(shí)顯著降低,而H1F-2

4、αmRNA水平則明顯升高。
　　(4)SPCA-1細(xì)胞經(jīng)線粒體活性氧族阻斷劑魚藤酮、二亞苯基碘鎓和粘噻唑菌醇處理4h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白含量明顯降低。
　　結(jié)論：
　　1.低氧可在人肺腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)HIF-1α和HIF-2α基因表達(dá);
　　2.翻譯后修飾在低氧對(duì)HIF-1α和HIF-2α的誘導(dǎo)中發(fā)揮重要作用;
　　3. HIF-2α和HIF-1αmRNA的蛋白水平在細(xì)胞低氧適應(yīng)反應(yīng)的不同時(shí)段有所