DNA Aβ-,3-10-基因疫苗免疫BALB-c小鼠誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)類型的研究.pdf

1、背景：
　　 阿爾茨海默?。ˋD）是導(dǎo)致老年癡呆最常見的原因，目前為止其病因尚不完全清楚且沒有有效的方法預(yù)防或治療該病。因Aβ的體內(nèi)外的神經(jīng)毒性使其成為治療預(yù)防AD的主要研究目標(biāo)。Aβ接種AD轉(zhuǎn)基因鼠時(shí)能夠誘發(fā)明顯的抗體反應(yīng)同時(shí)減少鼠腦內(nèi)Aβ的沉積。AN-1792進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)時(shí)部分病人出現(xiàn)嚴(yán)重的腦內(nèi)炎癥反應(yīng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Aβ1-42的C末端有數(shù)個(gè)抗原決定簇與T細(xì)胞反應(yīng)激活有關(guān)而N末段Aβ4-10片段含B細(xì)胞激活性抗原決定簇

2、，當(dāng)序列加上3號位氨基酸時(shí)與抗AB抗體的親和性明顯增強(qiáng)。
　　 目的：
　　 檢測DNAAβ3-10重組入質(zhì)粒pcDNA3.1+構(gòu)建成pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG疫苗，肌肉注射免疫BALB/c小鼠后誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)類型。
　　 方法：
　　 用內(nèi)切酶EcoRI、NotI酶切pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG，再用T4連接酶連接酶切產(chǎn)物構(gòu)建pcDNA3.1+-（Ap3-10）

3、10；用堿裂解法提取質(zhì)粒pcDNA3.1+-（Aβ3-10）10-CpG、pcDNA3.1+-（Ap3-10）10；用所得質(zhì)粒通過肌肉注射免疫BALB/c小鼠，同時(shí)設(shè)陽性對照組（Aβ1-42蛋白）、陰性對照組（PBS）；分離完成免疫的小鼠脾細(xì)胞接種于96孔板中分別加入抗原[（Aβ3-10）10或Aβ1-42蛋白]或ConA5％CO2孵箱37℃培養(yǎng)44小時(shí)后MTT法側(cè)細(xì)胞增殖反應(yīng)，留取上清用ELISA法測細(xì)胞因子IL-4，IFN-γ的濃度

4、；用SPSS軟件對實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 脾細(xì)胞增殖反應(yīng)結(jié)果：將調(diào)好濃度的脾細(xì)胞接種與96孔板上分別加入刺激物抗原或ConA培養(yǎng)44h后用MTT法測得細(xì)胞增情況，顯示各組在相應(yīng)抗原刺激后實(shí)驗(yàn)2組的增殖指數(shù)顯著高于陰性組（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)1組的增殖指數(shù)顯著高于實(shí)驗(yàn)2組（P<0.05），；實(shí)驗(yàn)1組的刺激指數(shù)小于陽性對照組（Aβ1-42蛋白組）有顯著差異（P<0.05

5、）。ConA刺激各組顯示實(shí)驗(yàn)2組刺激指數(shù)與陰性組無顯著差異（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)1組刺激指數(shù)顯著高于實(shí)驗(yàn)2組（P<0.05），但顯著低于陽性對照組（P<0.05）
　　 細(xì)胞因子檢測結(jié)果：檢測脾細(xì)胞增殖反應(yīng)所的細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-4、IFN-γ濃度顯示相應(yīng)抗原刺激的各組中實(shí)驗(yàn)2組的IL-4濃度顯著高于陰性組（P<0.05），而IFN-γ濃度實(shí)驗(yàn)2組與陰性組無顯著差異（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)1組的IL-4濃度、IFN-γ濃度均顯

6、著高于實(shí)驗(yàn)2組（P<0.05），但I(xiàn)L-4濃度的差異更明顯；實(shí)驗(yàn)1組的IL-4濃度、IFN-γ濃度均低于陽性對照組（P<0.05），但I(xiàn)L-4濃度差異更顯著。ConA刺激的各組顯示實(shí)驗(yàn)2組的IFN-γ濃度與陰性組無顯著差異（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)1組的IL-4濃度與實(shí)驗(yàn)2組無顯著差異（P>0.05）而IFN-γ濃度存在顯著差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 疫苗pcDNA3.1+-Aβ3-10-CpG免疫原性確實(shí)可