MiR-19b過表達(dá)對P19細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的:脊椎動(dòng)物的心臟是胚胎發(fā)育過程中最早形成并行使功能的器官，主要來源于中胚層間充質(zhì)細(xì)胞，其發(fā)生需經(jīng)過多細(xì)胞系特化、管狀結(jié)構(gòu)形成、最后精確組裝成成熟4個(gè)心腔結(jié)構(gòu)等發(fā)育過程，需要一系列重要的形態(tài)發(fā)生事件，包括細(xì)胞決定、細(xì)胞遷移和細(xì)胞分化等，這些過程出現(xiàn)的時(shí)空順序暗示了一種復(fù)雜的基因調(diào)控模式以保證胚胎心臟的協(xié)調(diào)發(fā)育。近年來，心臟發(fā)育的研究已經(jīng)取得了較大的進(jìn)展，然而心臟疾病發(fā)生的分子機(jī)制依然不很明確，更多的分子機(jī)制研究還需要進(jìn)一步的開展。mi

2、croRNA的出現(xiàn)，為我們帶來了新的研究思路。microRNA(miRNA)是一類小分子非編碼單鏈RNA，長約22個(gè)核苷酸，通過與靶mRNA3'非翻譯區(qū)(3'UTR)互補(bǔ)配對，抑制翻譯，從而在轉(zhuǎn)錄后水平對生物體內(nèi)基因時(shí)序性表達(dá)起到精細(xì)調(diào)節(jié)作用。近年來，大量研究表明microRNA在心臟發(fā)育、心肌肥厚、心力衰竭、心律失常以及高血壓等疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，使microRNA成為國際心血管研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。P19細(xì)胞在特定的條件下能

3、夠向心肌細(xì)胞分化，是研究心臟發(fā)育、基因調(diào)控的有用工具。miR-19b是通過芯片篩選出與心臟發(fā)育高度相關(guān)的一種miRNA，本研究旨在探討miR-19b過表達(dá)對P19細(xì)胞分化的影響。
　　方法:脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染miR-19b過表達(dá)質(zhì)粒與空載質(zhì)粒進(jìn)入P19細(xì)胞，通過殺稻瘟菌素篩選出穩(wěn)定株;通過DMSO將穩(wěn)定表達(dá)miR-19b的細(xì)胞株進(jìn)行誘導(dǎo)分化，應(yīng)用普通倒置顯微鏡觀察細(xì)胞跳動(dòng)情況;實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測miR-19b表達(dá)水平以及分化

4、基因(cTnT、ANP、GATA4)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染miR-19b過表達(dá)質(zhì)粒與空載質(zhì)粒進(jìn)入P19細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測證實(shí)miR-19b過表達(dá)載體與細(xì)胞系成功建立(P＜0.05);在P19細(xì)胞分化過程中，miR-19b過表達(dá)組心肌細(xì)胞分化數(shù)量增多，且miR-19b過表達(dá)組心肌標(biāo)志物均顯著高于對照組（P均＜0.05）。miR-19b顯著促進(jìn)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化。
　　結(jié)論:miR-19b過表達(dá)對P19細(xì)胞