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1、在真核生物中,DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)重要的修飾方式之一,對(duì)基因的表達(dá)具有調(diào)控作用,研究表明:DNA甲基化在動(dòng)物生長(zhǎng)和組織發(fā)育分化中具有重要作用。本研究以17周齡北京油雞肌肉和卵巢組織為實(shí)驗(yàn)材料,應(yīng)用甲基化敏感擴(kuò)增片段多態(tài)性(Methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)方法檢測(cè)2個(gè)組織基因組DNA甲基化程度,通過(guò)毛細(xì)管電泳結(jié)果優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)條件,開(kāi)發(fā)了MSAP熒光檢測(cè)數(shù)據(jù)的自動(dòng)分析軟件
2、,對(duì)北京油雞肌肉和卵巢組織及不同體重組間基因組DNA甲基化水平差異進(jìn)行研究。結(jié)果如下:
1、米用毛細(xì)管電泳熒光檢測(cè)技術(shù)分析MSAP選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物,通過(guò)對(duì)基因組DNA用量、預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋倍數(shù)、選擇性引物濃度、Mg2+濃度、dNTPs濃度、電泳DNA量、內(nèi)標(biāo)量和進(jìn)樣時(shí)間等8個(gè)主要參數(shù)進(jìn)行分析和優(yōu)化,優(yōu)化了用于北京油雞基因組DNA甲基化分析的MSAP毛細(xì)管電泳熒光檢測(cè)體系。
2、應(yīng)用MSAP方法檢測(cè)北京油雞肌肉組織基因組D
3、NA甲基化水平。對(duì)獲得的MSAP熒光檢測(cè)初始數(shù)據(jù)分別應(yīng)用直接取整法、整區(qū)間放置法和半?yún)^(qū)間放置法等三種自動(dòng)處理方法進(jìn)行分析并比較。結(jié)果顯示:整區(qū)間放置法和半?yún)^(qū)間放置法比直接取整法更適用于MSAP熒光檢測(cè)初始數(shù)據(jù)的分析,建立了基于半?yún)^(qū)間放置法分析原理的可在線分析MSAP熒光檢測(cè)初始數(shù)據(jù)的軟件—MSAP Analyst。
3、應(yīng)用MSAP方法檢測(cè)北京油雞肌肉和卵巢組織的基因組DNA甲基化狀態(tài)。12對(duì)選擇性擴(kuò)增引物共產(chǎn)生53027條清
4、晰的擴(kuò)增條帶,平均每個(gè)個(gè)體每對(duì)引物組合可獲得150個(gè)條帶。在檢測(cè)的個(gè)體中,肌肉組織的甲基化水平為54.04%,卵巢組織為57.06%,2種組織的甲基化水平差異顯著(P<0.05),肌肉和卵巢組織基因組DNA甲基化差異主要存在于全甲基化位點(diǎn)中。分離鑒定了5個(gè)可能與組織分化相關(guān)的特異性甲基化片段,除1個(gè)位于3'下游,其余均位于內(nèi)含子中。
4、應(yīng)用MSAP方法檢測(cè)高低體重組北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化狀態(tài)。12對(duì)選擇性擴(kuò)增引物
5、共產(chǎn)生50776條清晰的擴(kuò)增條帶,高體重組北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化水平為53.70%,低體重組北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化水平為55.86%,方差分析結(jié)果顯示:高低體重組北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化水平差異顯著(P<0.05),體重因素與性別因素之間無(wú)互作效應(yīng)。Pearson等級(jí)相關(guān)分析顯示:北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化水平與體重之間存在顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。分離鑒定了14個(gè)可能與體重有關(guān)的特異性甲基化
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