高壓氧預(yù)處理與富氫生理鹽水治療對皮瓣缺血再灌注損傷影響的研究.pdf

1、背景:皮瓣移植是修復(fù)難愈合創(chuàng)面與器官重建的重要手段，影響手術(shù)成功與皮瓣存活的主要威脅之一為皮瓣的缺血再灌注損傷，因此多年來人們一直致力于探索避免該損傷的方法。目前已有文獻表明，高壓氧預(yù)處理有助于皮瓣移植手術(shù)成功率的提高;而另一種目前正處于新興研究熱潮中的氣體分子——氫氣，則被證明有提高動物缺血再灌注皮瓣存活率的潛力。而在上述兩種氣體分子對缺血再灌注皮瓣保護作用的比較與聯(lián)合應(yīng)用價值評估方面，目前尚無相關(guān)報導(dǎo)問世。
　　目的:本研究目

2、的即為建造一種典型的動物皮瓣缺血再灌注模型，并通過此模型研究高壓氧預(yù)處理、氫氣治療與兩者聯(lián)合治療對缺血再灌注皮瓣的保護效果，從而在進一步深入探索氫氣分子治療原理的基礎(chǔ)上，對氫氧聯(lián)合治療的前景作出初步評價。
　　方法:本實驗使用雄性SD大鼠，首先建造以其左髂腰動脈皮支為蒂的背部6×9cm超大皮瓣，再用動脈夾夾閉皮瓣蒂5h以達到缺血再灌注效果。高壓氧預(yù)處理與氫氣治療分別通過術(shù)前3天給動物高壓氧治療和術(shù)后每天給動物腹腔注射富氫生理鹽水的

3、方式實現(xiàn)。我們用激光多普勒血流灌注成像儀監(jiān)測并比較未經(jīng)治療、經(jīng)高壓氧預(yù)處理、經(jīng)富氫生理鹽水腹腔注射和經(jīng)氫氧聯(lián)合治療大鼠背部皮瓣的血流灌注水平，并用H-E染色和TUNEL染色的方式觀察其皮瓣組織的炎癥和凋亡情況。此外，我們還使用免疫組織化學(xué)，蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)和實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-q PCR)等多種方法分別從組織水平、蛋白水平和基因水平上對實驗結(jié)果進行了印證與解釋。
　　結(jié)果:以左側(cè)髂腰動脈皮支為蒂

4、的大鼠背部超大皮瓣，在通常條件下可完全或大部分存活，并保證整塊皮瓣血流灌注呈高水平;而當(dāng)經(jīng)歷嚴(yán)重的缺血再灌注損傷后，皮瓣壞死比例增加，存活皮瓣灌注量亦明顯降低。經(jīng)高壓氧預(yù)處理治療后，皮瓣在術(shù)后24h及72h的灌注情況均有所改善;經(jīng)富氫生理鹽水腹腔注射后，皮瓣在術(shù)后24h的灌注情況與未經(jīng)治療時無明顯區(qū)別，但在術(shù)后72h時的灌注情況明顯改善;經(jīng)氫氧聯(lián)合治療后，皮瓣的灌注水平較分別治療時又有進一步提高。皮瓣的H-E染色和TUNEL染色結(jié)果顯示

5、，高壓氧預(yù)處理和富氫生理鹽水腹腔注射均能降低皮瓣炎癥和凋亡水平;在抑制細胞凋亡方面，氫氣治療比氧氣治療更勝一籌;同時兩者聯(lián)合應(yīng)用效果更佳。免疫組織化學(xué)、Western Blot與RT-q PCR結(jié)果進一步證實:高壓氧預(yù)處理與富氫生理鹽水腹腔注射均能有效抑制皮瓣組織中炎癥相關(guān)蛋白NF-κB和促凋亡蛋白Bax、pJNK水平，同時從基因水平促進抑凋亡基因Bcl-2的表達;兩種方法相比，富氫生理鹽水比高壓氧預(yù)處理的抗凋亡作用更強，且兩者聯(lián)合應(yīng)用

6、具有協(xié)同抗凋亡作用。
　　結(jié)論:高壓氧預(yù)處理與富氫生理鹽水腹腔注射均能有效減輕大鼠皮瓣的缺血再灌注損傷，且兩種方法具有協(xié)同治療作用，體現(xiàn)在皮瓣的血流灌注水平進一步提高、炎癥與細胞凋亡情況進一步減輕等方面;這可能與術(shù)前高壓氧預(yù)處理營造的皮瓣高氧、高灌注環(huán)境和術(shù)后富氫生理鹽水治療對ROS→pASK1→pJNK→Bcl-2→Bax→Cyt-C→Caspase→Apoptosis凋亡通路抑制的聯(lián)合作用有關(guān)。兩者在臨床上聯(lián)合應(yīng)用的前景一片光