口腔綜合治療臺水路微生物、生物膜檢測及其消毒效果的實驗研究.pdf

1、口腔綜合治療臺水路(DentalUnitWaterLines,DUWL)存在嚴重的微生物污染，微生物以浮游微生物和生物膜兩種形式存在。微生物污染來源主要包括：供水源本身存在微生物污染、綜合治療臺口腔設(shè)備回吸作用致微生物倒流入水路和供水管內(nèi)壁的生物膜釋放微生物造成的污染。大量研究證實，水路中存在銅綠假單胞菌、嗜肺軍團菌、非結(jié)核分枝桿菌、假絲酵母菌屬等多種條件致病菌，可能引起醫(yī)院感染的發(fā)生。研究表明，通過對口腔綜合治療臺水路進行消毒等處理，

2、可降低微生物濃度，一定程度上預(yù)防和控制醫(yī)院感染的發(fā)生，從而保證醫(yī)患安全。 目的：本實驗擬對獨立水源和市政水源兩種供水方式的口腔綜合治療臺三用槍噴頭采集的水樣進行微生物基線值定量檢測、微生物種類鑒定及對銅綠假單胞菌、嗜肺軍團菌、大腸埃希氏菌三種條件致病菌定性檢測，并觀察生物膜結(jié)構(gòu)。采用525mg/L次氯酸鈉對獨立水源水路進行化學(xué)消毒，比較其消毒前后水路微生物總菌落數(shù)、微生物種類、三種條件致病菌檢出率的差異及生物膜結(jié)構(gòu)的變化，以研究

3、次氯酸鈉消毒劑對水路消毒的效果和方法，進一步認識水路消毒的必要性，同時為本學(xué)科在DUWL的感染控制方面提供消毒學(xué)、流行病學(xué)等理論基礎(chǔ)與實驗依據(jù)。 方法：選擇40臺口腔綜合治療臺，采集三用槍水樣進行營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)48h計算總菌落數(shù)；采用觸酶實驗、生化鑒定、VITEK-全自動微生物鑒定儀等方法檢測水樣中微生物種類，并按國家標準對銅綠假單胞菌、嗜肺軍團菌、大腸埃希氏菌三種條件致病菌進行定性檢測。同時，從口腔綜合治療臺水路三用槍近工作端連

4、接管內(nèi)壁采集生物膜樣本，通過細菌培養(yǎng)檢測生物膜中微生物的總菌落數(shù)，并采用激光共聚焦掃描顯微鏡(ConfocalLaserScanningMicroscopy,CLSM)和掃描電鏡(ScanningElectronicMicroscope,SEM)觀察生物膜結(jié)構(gòu)。選用525mg/L次氯酸鈉消毒劑，采用沖洗消毒方法對獨立水源口腔綜合治療臺水路進行化學(xué)消毒后，采集水樣和生物膜樣，進行細菌培養(yǎng)并菌落計數(shù)、鑒定微生物種類及定性檢測水樣中三種條件致

5、病菌的檢出率，并觀察生物膜結(jié)構(gòu)。結(jié)果采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行兩樣本t檢驗、配對t檢驗和單因素方差分析，α設(shè)在0.05。 結(jié)果：①消毒前DUWL微生物菌落數(shù)基線檢測結(jié)果：獨立水源和市政水源口腔綜合治療臺水路的總菌落數(shù)幾何均值分別為2.23×103CFU/ml和5.32×103CFU/ml，統(tǒng)計分析顯示，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，均超過美國牙醫(yī)學(xué)協(xié)會(AmericanDentalAssociation，ADA)口腔醫(yī)

6、療用水的標準(菌落數(shù)≤200CFU/ml)。獨立水源和市政水源口腔綜合治療臺水路分別鑒定出八種和十二種細菌，優(yōu)勢菌為革蘭氏陰性桿菌，如皮氏/湯氏羅爾斯頓菌、魯氏/瓊氏不動桿菌、醋酸鈣-鮑氏不動桿菌等。所檢測的三種條件致病菌檢出結(jié)果為：獨立水源與市政水源DUWL銅綠假單胞菌檢出率分別為35％(7/20)和30％(6/20)，大腸埃希氏菌檢出率分別為0和15％(3/20)；所有水樣均未檢出嗜肺軍團菌。消毒前獨立水源和市政水源DUWL生物膜總

7、菌落數(shù)幾何均值分別為1.7×103CFU/cm2和9.5×103CFU/cm2，P>0.05，差別無統(tǒng)計學(xué)意義。CLSM及SEM觀察結(jié)果顯示，獨立水源和市政水源口腔綜合治療臺水路內(nèi)壁生物膜結(jié)構(gòu)相似，呈柵欄狀，并伴有桿菌與球菌分布于基質(zhì)中。②獨立水源DUWL消毒5周，每周微生物總菌落數(shù)幾何均值均為0，與消毒前基線比較，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，消毒后所有口腔綜合治療臺水路水樣總菌落數(shù)均符合ADA口腔醫(yī)療用水水質(zhì)要求。消毒后獨立水源

8、口腔綜合治療臺水路水樣中鑒定出三種細菌，其中泡囊短波單胞菌(Brevundimonasvesicularis)和施氏假單胞菌(Pseudomonasstutzeri)消毒前未檢出。三種條件致病菌均未檢出。獨立水源口腔綜合治療臺水路消毒前、后生物膜菌落數(shù)幾何均值分別為1.7×103CFU/cm2、0CFU/cm2，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。CLSM及SEM觀察結(jié)果顯示，生物膜結(jié)構(gòu)受到一定程度破壞，但基質(zhì)仍然存在。 結(jié)論：①

9、口腔綜合治療臺水路存在微生物污染，并且檢出銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌兩種條件致病菌，同時口腔綜合治療臺水路內(nèi)壁生物膜含有高密度細菌，存在引起醫(yī)院感染的潛在風(fēng)險，為保證醫(yī)療安全，有必要對口腔綜合治療臺水路進行消毒處理。②525mg/L次氯酸鈉消毒劑對口腔綜合治療臺水路具有較好的消毒效果，能有效地殺滅微生物與條件致病菌，并在一定程度上破壞生物膜結(jié)構(gòu)。次氯酸鈉消毒劑可常規(guī)應(yīng)用于臨床口腔綜合治療臺水路的消毒處理。③市政水源口腔綜合治療臺水路與市