5’-氮雜胞苷對激素性股骨頭壞死骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化作用的研究.pdf

1、目的：探討5’-氮雜胞苷（5’-Azacytidine,5’-Aza-dc)對激素性股骨頭壞死患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（human mesenchymal stem cells,hMSCs）增殖能力的影響、DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)物的變化及其對成骨、成脂分化能力的作用。
　　方法：2012年8月-2013年4月，經(jīng)患者知情同意和武漢協(xié)和醫(yī)院倫理委員會審批后，選取22例激素性股骨頭壞死患者（11例男性，11例女性，39-67歲，平均年齡53

2、.5歲）和20例的股骨頸骨折患者(11例男性，9例女性，40-70歲，平均年齡56.2歲)，在嚴(yán)格無菌條件下抽取患者股骨骨髓，經(jīng)密度梯度離心法體外分離、培養(yǎng)hMSCs，貼壁細(xì)胞傳代，取第三代細(xì)胞實驗，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞表面抗原標(biāo)記物檢測，確定最適5’-氮雜胞苷干預(yù)濃度后干預(yù)培養(yǎng)72h，隨后對三組hMSCs進(jìn)行成骨、成脂分化誘導(dǎo)培養(yǎng)2周，接著對細(xì)胞進(jìn)行堿性磷酸酶含量測定（alkaline phosphatase，ALP）、茜素紅和油紅

3、O染色，實時定量PCR檢測細(xì)胞Runx-2，Osteocalcin、DNMT1和PPAR-γmRNA表達(dá)情況和免疫印跡實驗。
　　結(jié)果：激素性股骨頭壞死組hMSCs集落形成能力比正常對照組有顯著下降（P＜0.001）。使用15μM5’-Aza-dc干預(yù)培養(yǎng)后能在一定程度上促進(jìn)激素性股骨頭壞死組hMSCs增殖能力，且干預(yù)培養(yǎng)72h的hMSCs在成脂分化誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后，通過油紅O染色、DNMT1和PPAR-γmRNA和蛋白質(zhì)測定，發(fā)現(xiàn)

4、其全基因組甲基化水平和成脂分化能力接近正常對照組，而5’-Aza-dc干預(yù)培養(yǎng)72h的hMSCs在成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后，根據(jù)堿性磷酸酶檢測、茜素紅染色和Runx-2、Osteocalcin mRNA及蛋白測定，發(fā)現(xiàn)其成骨分化潛能較干預(yù)前明顯提高，并接近正常對照組水平。
　　結(jié)論：15μM5’-氮雜胞苷干預(yù)培養(yǎng)激素性骨壞死患者h(yuǎn)MSCs，通過改變細(xì)胞成骨和成脂分化的平衡，能促進(jìn)細(xì)胞的增殖能力，降低全基因組甲基化水平，使成骨能力加強(qiáng)