黃芪多糖對(duì)2型糖尿病模型大鼠AMPK、UCP2表達(dá)的影響.pdf

1、背景：2型糖尿病(T2DM)作為作為最常見的內(nèi)分泌代謝疾病，在近些年，發(fā)病率逐年上升，胰島素抵抗(IR)是T2DM的發(fā)病基礎(chǔ)。而信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常是IR的一個(gè)重要機(jī)制，有研究顯示，黃芪多糖(APS)可以改善胰島素抵抗，提高胰島素敏感性，調(diào)節(jié)糖、脂代謝，但是其深層的機(jī)制尚未完全研究清楚。
　　 目的：觀察APS對(duì)2型糖尿病大鼠肝臟腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activatedprotein kinase；AMPKα)及胰腺解耦連蛋白2(

2、uncoupling proteins2；UCP2)在基因和蛋白水平表達(dá)的影響，探討APS改善胰島素抵抗(IR)的可能作用機(jī)制，為今后APS應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。
　　 方法：(1)隨機(jī)選用健康雄性SD(Spargue-Dawley)大鼠60只，體重210-230g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為空白對(duì)照組(NC組，n=10)和高脂模型組(HFM組.n=50)，分別給予標(biāo)準(zhǔn)飼料和高脂飼料喂養(yǎng)。同時(shí)每周記錄大鼠體重(BW)，喂養(yǎng)6周末

3、，HFM組的平均體重較NC組平均體重大于20％，認(rèn)為肥胖大鼠造模成功。
　　 (2)HFM組繼而應(yīng)用鏈脲佐菌素(Steptozotocin，STZ，25mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。72h后尾靜脈采血測(cè)量隨機(jī)血糖，隨機(jī)血糖>16.7mmol/L的大鼠納入糖尿病模型組，并在STZ注射2周末復(fù)查隨機(jī)血糖，把血糖<16.7mmol/L大鼠剔除出組。將造模成功大鼠(n=45)隨機(jī)分為4組，分別為糖尿病對(duì)照組(DMC組，生理

4、鹽水灌胃，n=12)、吡格列酮組(Pio組，20mg/kg·d吡格列酮灌胃，n＝11)、黃芪多糖組(APS組，400mg/kg·d APS灌胃，n＝11)和黃芪多糖+吡格列酮組(APP組，400mg/kg·d APS和20mg/kg·d吡格列酮灌胃，n=11)，同時(shí)NC組給予同體積生理鹽水灌胃，各組飲食不變。
　　 (3)藥物干預(yù)4周后，將各組大鼠予10%水合氯醛腹腔麻醉，心內(nèi)取血用于檢測(cè)血漿空腹血糖(FBG)，血清膽固醇(TC

5、)、甘油三酯(TG)、空腹胰島素(FINS)，并計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI)。分離附睪脂肪摯、腎周及網(wǎng)膜脂肪并稱重，計(jì)算內(nèi)臟脂肪含量(VF/W)。采用半定量逆轉(zhuǎn)錄PCR法(RT-PCR)檢測(cè)肝臟AMPKα及胰腺UCP2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量，采用免疫印跡法(Western-Blotting，WB)測(cè)肝臟AMPKα、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phospho-AMP-activated protein kinase；p-AMPKα)及UCP

6、2蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：(1).高脂飼養(yǎng)6周可誘導(dǎo)SD大鼠明顯肥胖，HFM組體重顯著增加，與NC組比較，差異有顯著性(P<0.01)；兩組大鼠之間隨機(jī)血糖比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。STZ造模后，模型大鼠隨機(jī)血糖水平顯著升高，差異有顯著性(P<0.01)。
　　 (2).在12周末，和NC組比較，DMC組、Pio組、APS組、APP組的FBG、TG、TC、FINS及VF/W水平升高，ISI水平降低，差異均有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。和DMC組比較，Pio組、APS組、APP組FBG、TG、TC、FINS水平及VF/W降低，ISI水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。胰島素抵抗模型成功，與APP組比較，APS組、Pio組上述指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 (3).RT-PCR檢測(cè)：和NC組比較，其它各組的AMPKα的mRNA表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同DMC組比較，APS組、Pio組、AP

8、P組的AMPKα的mRNA表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同APP組比較，Pio組、APS組的AMPKα的mRNA表達(dá)量降低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Pio組、APS組的AMPKα的mRNA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 和NC組比較，余下4組的UCP2的mRNA表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同DMC組比較，APS組、Pio組、APP組UCP2的mRNA表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05

9、)。同APP組比較，Pio組、APS組UCP2的mRNA表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Pio組及APS組UCP2差異物統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 (4).Western-Blotting檢測(cè)：和NC組比較，DMC組、APS組、Pio組、APP組的AMPKα、p-AMPKα蛋白表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；和DMC組比較，Pio組、APS組、APP組的AMPKa、p-AMPKα表達(dá)量升高，差

10、異有顯著意義(P<0.05)；與APP組比較，APS組、Pio組的AMPKα、p-AMPKα蛋白表達(dá)量降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而Pio組、APS組的AMPKα、p-AMPKα蛋白表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 和NC組比較，DMC組、APS組、Pio組、APP組的UCP2蛋白表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；和DMC組比較，Pio組、APS組、APP組的UCP2蛋白表達(dá)量降低<0.05)