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1、目的:研究胃癌和癌旁正常胃粘膜組織中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)的表達(dá)情況,探討胃癌組織中5-LOX的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系;觀察5-LOX選擇性抑制劑AA861對(duì)胃癌AGS細(xì)胞增殖凋亡及5-LOX基因表達(dá)的影響。 方法:采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)了30例胃癌新鮮標(biāo)本及相匹配的癌旁正常胃粘膜組織中5-LOXmRNA的表達(dá)情況。免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)40例胃癌標(biāo)本及30例癌旁正常胃
2、粘膜組織中5-LOX蛋白的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系。體外培養(yǎng)人胃癌AGS細(xì)胞,應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)及四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法觀測(cè)AA861對(duì)胃癌AGS細(xì)胞體外增殖的抑制效應(yīng)。透射電子顯微鏡技術(shù)(TEM)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡形態(tài)。TdT酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)計(jì)數(shù)細(xì)胞凋亡指數(shù)。半定量RT-PCR檢測(cè)AA861對(duì)AGS細(xì)胞5-LOXmRNA表達(dá)的影響。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)AA861對(duì)AGS細(xì)胞中5-LOX蛋
3、白表達(dá)的影響。 結(jié)果:胃癌組織中存在5-LOXmRNA(76.7%)及蛋白(72.5%)的表達(dá),在癌旁正常胃粘膜組織中其表達(dá)量分別為(17%,23%),胃癌組織中5-LOX的表達(dá)顯著高于癌旁正常胃黏膜組織,兩者相比差異有顯著意義(P<0.05)。5-LOX表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)(P<0.05)。AA861對(duì)胃癌AGS細(xì)胞有時(shí)間及濃度依賴(lài)性增殖抑制作用。AA861處理后AGS細(xì)胞發(fā)生凋亡,形態(tài)學(xué)上可見(jiàn)細(xì)胞核固縮,
4、染色質(zhì)邊集,凋亡小體形成等改變;FCM術(shù)可檢測(cè)到細(xì)胞凋亡的“亞二倍體峰”;TUNEL原位檢測(cè)凋亡技術(shù)顯示25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L濃度的AA861處理AGS細(xì)胞48h后,細(xì)胞凋亡率為(8.2±1.6)%(24.6±3.3)%和(51.2±1.8)%,顯著高于對(duì)照組(3.2±0.64)%(P<0.05)。AA861處理前后細(xì)胞5-LOXmRNA和蛋白表達(dá)無(wú)明顯改變。 結(jié)論:5-LOX基因在胃癌組織中表達(dá)
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