高鉀溶液對(duì)慢性非細(xì)菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響及意義.pdf

1、目的：建立慢性非細(xì)菌性前列腺炎大鼠模型,探討SD大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎前列腺平滑肌細(xì)胞(PSMC)內(nèi)游離鈣離子濃度([Ca2+]i)在高鉀溶液作用下的變化及臨床意義。
　　方法：將SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組20只。實(shí)驗(yàn)組行去勢(shì)手術(shù),十周切口愈合后腹腔注射17-β雌二醇0.25mg/kg次/d,對(duì)照組每只大鼠腹腔注射生理鹽0.6ml每日一次。連續(xù)注射30d后,CO2吸入處死,于無(wú)菌條件下迅速取出前列腺背外側(cè)葉組織置入D-

2、Hanks液,轉(zhuǎn)入無(wú)菌室超凈臺(tái),除去前列腺的血管、被膜及脂肪等組織,每只大鼠取部分組織行HE染色,石蠟包埋切片后行組織學(xué)觀察。體外培養(yǎng)純化PSMC,在細(xì)胞傳代至共聚焦專(zhuān)用培養(yǎng)皿中第3天,棄去培養(yǎng)液,避光條件下加入4μl Quest Fluo-8TM和500μl NPSS,使其終濃度為0.5μmol/l,并置于培養(yǎng)箱中靜置孵育1h,然后用無(wú)Ca2+Crebs洗滌,向共聚焦專(zhuān)用培養(yǎng)皿中加入1ml Crebs,轉(zhuǎn)移至激光共聚焦顯微鏡上,激發(fā)波

3、長(zhǎng)為488nm,選擇512×512像素采集二維圖片,每10S掃描一幀,觀測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度。檢測(cè)基線(xiàn)后,緩慢向共聚焦專(zhuān)用培養(yǎng)皿中加入高鉀溶液250μl,使其終濃度為60mmol/L。每視野選取5個(gè)細(xì)胞,觀測(cè)鈣離子熒光強(qiáng)度的變化情況,所得圖片應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡專(zhuān)用軟件轉(zhuǎn)化為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),取平均值。采用SPSS18.0軟件進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示,采用單因素成組資料的t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：光鏡下顯示實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本具有典型慢性前列腺炎

4、(CP)的病理特征,對(duì)照組未見(jiàn)炎癥表現(xiàn)。采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法證實(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組為前列腺平滑肌細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組PSMC內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度升高幅度分別為27.86±9.88和7.61±4.31,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：采用去勢(shì)+雌二醇注射的方法可成功建立CP模型。CAPSD大鼠PSMC內(nèi)[Ca2+]i在高鉀溶液作用下的升高幅度明顯大于正常對(duì)照組,高鉀溶液引起細(xì)胞外鈣離子的跨膜內(nèi)流,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高,