慢性非細菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌細胞內(nèi)鈣離子濃度變化及意義.pdf

1、目的:通過測定體外培養(yǎng)的正常SD大鼠和慢性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌細胞內(nèi)游離鈣離子濃度,來了解慢性前列腺炎前列腺平滑肌細胞與正常前列腺平滑肌細胞內(nèi)游離鈣離子濃度的差異及其意義,從而探討細胞內(nèi)游離鈣離子在慢性前列腺炎發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:隨機將50只大鼠等分為炎癥組和正常對照組,取10只正常SD大鼠進行前列腺蛋白的提取純化,分別于第0、30d對炎癥組每只大鼠進行皮內(nèi)多點注射大鼠前列腺蛋白提純液和FCA乳劑(比例為1:1的

2、混懸液)1.0ml,濃度為40mg/ml,每只腹腔注射百白破疫苗0.5ml,以造成自身免疫性的慢性前列腺炎癥,另取正常SD大鼠同樣方法注射生理鹽水作為對照組;造模45天后,每只大鼠取部分前列腺組織HE染色,石蠟包埋切片后組織學(xué)觀察,證實造模成功后離體培養(yǎng)SD大鼠前列腺平滑肌細胞,運用差速貼壁法純化前列腺平滑肌細胞,運用免疫組化SP法證實培養(yǎng)出來的細胞為平滑肌細胞;用消化法將細胞制成細胞懸液,將高度特異性鈣離子熒光指示劑Fluo3-AM加

3、入該細胞懸液中,置二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1h負載細胞,離心,去掉多余的染料。用無鈣緩沖液反復(fù)洗滌3次,最后應(yīng)用流式細胞儀對細胞內(nèi)鈣離子濃度進行檢測。
　　結(jié)果:通過流式細胞儀用480nm波長激發(fā)Fluo3-AM,檢測慢性前列腺炎組SD大鼠以及對照組SD大鼠前列腺平滑肌細胞內(nèi)鈣離子在發(fā)射波長為525nm時的熒光強度值,分析比較測得平行熒光強度值發(fā)現(xiàn)模型組的熒光值明顯高于正常對照組SD大鼠(P＜0.05),差異有顯著性。
　　結(jié)論

4、:當(dāng)用480nm波長激發(fā)Fluo3-AM時,其熒光強度與游離鈣離子濃度成正比,以上結(jié)果表明慢性前列腺炎SD大鼠平滑肌細胞內(nèi)鈣離子濃度較正常SD大鼠是升高的,我們認(rèn)為由于慢性前列腺炎引起的前列腺平滑肌細胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高,導(dǎo)致了鈣穩(wěn)態(tài)產(chǎn)生波動,使細胞內(nèi)產(chǎn)生鈣超載等一系列活動,繼而影響到前列腺組織及細胞的各項生理功能,前列腺平滑肌細胞內(nèi)游離鈣離子濃度變化可能是慢性前列腺炎發(fā)病的重要影響因素,PSMCs內(nèi)游離鈣離子濃度在發(fā)病機制中具有一