瑞巴派特對(duì)NSAIDs腸病的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:NSAIDs臨床應(yīng)用廣泛,NSAIDs胃腸粘膜損傷為常見不良反應(yīng)。其中NSAIDs胃粘膜損害已被廣泛研究,并有防治對(duì)策。對(duì)NSAIDs腸病的診治尚未深入。NSAIDs腸病早期損傷特征為腸粘膜屏障損害。通過檢測腸粘膜通透性改變,即可早期發(fā)現(xiàn)小腸粘膜屏障損害。另一方面,瑞巴派特作為胃粘膜保護(hù)劑在臨床廣泛應(yīng)用,但對(duì)小腸粘膜通透性的影響尚未見報(bào)道。因此本文通過建立動(dòng)物NSAIDs腸病模型,觀察瑞巴派特對(duì)NSAIDs腸病中腸粘膜通透性的影響

2、,為臨床應(yīng)用瑞巴派特防治NSAIDs腸病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的:用昆明種小鼠建立NSAIDs腸病模型,研究小鼠小腸粘膜通透性的改變,并在此模型基礎(chǔ)上研究瑞巴派特對(duì)小鼠NSAIDs腸病模型的保護(hù)作用及作用機(jī)制。
　　方法:
　　1. NSAIDs腸病模型的建立
　　(1)不同NSAIDs腸病模型的比較
　　選用阿司匹林、吲哚美辛、雙氯芬酸鈉制備NSAIDs腸病模型。其中阿司匹林500mg/kg、吲哚美辛5m

3、g/kg、雙氯芬酸鈉10mg/kg灌胃,各組給藥時(shí)間3天,正常組以溶媒灌胃。3天后取小腸進(jìn)行EB通透性實(shí)驗(yàn),并計(jì)算小腸潰瘍數(shù)目。
　　(2)不同劑量和不同時(shí)間雙氯芬酸鈉腸病模型的比較
　　采取不同劑量雙氯芬酸鈉(2.5mg/kg、5mg/kg,10mg/kg灌胃3天),和不同時(shí)間(雙氯芬酸鈉10mg/kg分別灌胃1、2、3天),以確定雙氯芬酸鈉腸病模型的時(shí)間和劑量。正常組以溶媒灌胃。3天后取小腸進(jìn)行EB通透性實(shí)驗(yàn),并計(jì)算小腸

4、潰瘍數(shù)目。
　　2.瑞巴派特對(duì)NSAIDs腸病模型的保護(hù)作用及機(jī)制研究。
　　根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選用雙氯芬酸鈉2.5mg/kg灌胃3天制備小鼠NSAIDs腸病模型,小鼠隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、瑞巴派特給藥組(100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg)、谷氨酰胺給藥組(1000mg/kg),各組給藥時(shí)間3天,正常對(duì)照組和模型對(duì)照組以溶媒灌胃。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后觀察小腸粘膜損傷情況,取小鼠小腸進(jìn)行HE染色和透射

5、電鏡檢查,采用EB和FITC-dextran方法檢測小腸粘膜通透性,同時(shí)檢測小腸粘膜髓過氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量,并測定小鼠肝臟線粒體膜電位、線粒體腫脹度、NADH水平、SDH及ATPase活性。
　　結(jié)果:
　　1. NSAIDs腸病模型的建立
　　比較不同NSAIDs腸病模型發(fā)現(xiàn),阿司匹林組小鼠小腸粘膜未見明顯潰瘍,小腸粘膜對(duì)EB的通透性有所升高(621.1±114.2vs460.6±89.7u

6、g/g),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。吲哚美辛組小鼠小腸粘膜損害明顯,表現(xiàn)為小腸潰瘍明顯增多(8.2±1.9vs0),小腸對(duì)EB通透性顯著升高(2132.0±315.7vs460.6±89.7ug/g)。雙氯芬酸鈉(10mg/kg給藥3天)誘導(dǎo)小腸顯著損傷,較吲哚美辛組小腸粘膜損傷較輕。
　　不同劑量雙氯芬酸鈉組比較發(fā)現(xiàn),隨著給藥劑量增加和給藥時(shí)間延長,小鼠小腸粘膜損害明顯。因此,選擇雙氯芬酸鈉2.5mg/kg作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　2.瑞巴

7、派特對(duì)NSAIDs腸病模型的保護(hù)作用及機(jī)制研究
　　與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組小腸粘膜通透性顯著升高(EB887.1±108.3vs460.6±89.7 ug/g;FITC-D9.77±1.03vs5.56±1.82 ug/ml),小腸粘膜損傷評(píng)分增高(4.8±0.4vs0),電鏡檢查小腸粘膜絨毛變短、萎縮,細(xì)胞間連接復(fù)合體縮短、變寬,細(xì)胞間隙擴(kuò)大,線粒體腫脹,線粒體嵴突破壞。同時(shí),小腸粘膜MDA含量和MPO活性增高(MDA1.

8、65±0.32vs0.97±0.28;MPO0.236±0.027vs0.159±0.02,P﹤0.01)。肝線粒體膜電位及腫脹度明顯改變,NADH含量,SDH及ATPase活性降低(NADH25.53±5.25vs55.50±6.63;SDH14.15±3.55vs32.67±8.48 U/mg protein;ATPase6.52±1.32vs11.24±1.60 umolPi/mgprotein/hour,均P﹤0.01)。瑞巴派

9、特不同劑量組均可降低小腸粘膜通透性(P﹤0.01),小腸粘膜絨毛形態(tài)、細(xì)胞間隙及線粒體形態(tài)接近正常,小腸潰瘍和粘膜病理評(píng)分、MDA含量和MPO活性均減低(P﹤0.01)。肝線粒體膜電位及腫脹度改善,NADH含量,SDH及ATPase活性升高(P﹤0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.不同NSAIDs腸病模型中,雙氯芬酸鈉2.5mg/kg灌胃3天具有小腸粘膜通透性增高的NSAIDs腸病模型。
　　2.瑞巴派特對(duì)NSAIDs腸