水甘油通道蛋白基因StFPS1對玉米大斑病菌生長發(fā)育及侵染能力的影響.pdf

1、本實驗室在前期研究中已經(jīng)獲得了玉米大斑病菌水甘油通道蛋白基因StFPS1，本研究在此基礎(chǔ)上，采用RNAi技術(shù)獲得了該基因的沉默轉(zhuǎn)化子;通過比較轉(zhuǎn)化子與野生型菌株在生長發(fā)育、侵入能力及其對高滲透脅迫的反應(yīng)，明確該基因的功能。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)以pSilent-1質(zhì)粒為基本骨架，構(gòu)建了玉米大斑病菌水甘油通道蛋白基因StFPS1的RNAi載體，轉(zhuǎn)化野生型菌株原生質(zhì)體，利用潮霉素B抗性、RT-PCR篩選得到了2株StFPS1基

2、因的RNAi轉(zhuǎn)化子，分別命名為fps1-1和fps1-2;利用Real-time RCR技術(shù)確定轉(zhuǎn)化子中StFPS1基因表達水平分別為野生型的0.34％和5.49％。
　　(2)與野生型菌株相比，轉(zhuǎn)化子在PDA培養(yǎng)基上生長速度降低，產(chǎn)孢量降低，基因沉默較強的菌株（fps1-1）失去產(chǎn)孢能力;菌絲分隔變長，細胞膨大，且基因沉默強的菌株（fps1-1）菌絲出現(xiàn)彎曲。表明StFPS1基因與玉米大斑病菌菌絲發(fā)育及分生孢子的產(chǎn)量密切相關(guān)。<

3、br>　　(3)在0.5M NaCl高滲脅迫處理下，與野生型菌株相比，轉(zhuǎn)化子菌落生長速率受抑制程度低;轉(zhuǎn)化子菌絲細胞膨大為球型，分隔增多，間距變短，菌絲內(nèi)甘油含量明顯高于野生型。說明StFPS1基因參與玉米大斑病菌高滲脅迫反應(yīng)，且起負調(diào)控作用。
　　(4)與野生型相比，轉(zhuǎn)化子fps1-2附著胞發(fā)育延遲，能穿透玻璃紙，轉(zhuǎn)化子fps1-1不產(chǎn)生附著胞，不能穿透玻璃紙。說明StFPS1基因影響玉米大斑病菌附著胞發(fā)育及侵染能力。
　

4、　(5)通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，與野生型相比，轉(zhuǎn)化子fps1-1細胞壁明顯變薄;轉(zhuǎn)化子對Congo red、CFW、SDS等細胞壁合成抑制劑的敏感性下降。說明StFPS1基因與玉米大斑病菌細胞壁的形態(tài)建成密切相關(guān)。
　　(6)利用Real-time RCR技術(shù)分析轉(zhuǎn)化子中HOG-MAPK級聯(lián)途徑和CWI-MAPK級聯(lián)途徑關(guān)鍵基因（StSHO1、StHOG1、 StSLT2）基因的表達水平，發(fā)現(xiàn)與野生型相比基因表達水平均明顯下降。預(yù)示