尾加壓素Ⅱ和轉(zhuǎn)化生長因子-β1在促進大鼠血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化中的相互作用.pdf

1、目的：血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)變在血管重塑、纖維化過程中發(fā)揮重要作用，本室前期研究發(fā)現(xiàn)，尾加壓素II（UII）能夠促進血管外膜成纖維細胞向肌成纖維細胞表型轉(zhuǎn)變、促進膠原合成，其機制尚待闡明。已知轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1 ）是促進成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化和膠原合成的重要活性因子，為此，本研究通過體外培養(yǎng)大鼠血管外膜成纖維細胞，觀察尾加壓素II刺激后轉(zhuǎn)化生長因子β1 表達的變化，以及UII 、TGF-β1處理后α-平滑肌肌動蛋白mRNA及蛋

2、白表達的變化，探討UII對TGF-β1 表達的影響以及兩者在促血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化中的相互作用及其機制。
　　 方法：①用貼塊法培養(yǎng)大鼠胸主動脈血管外膜成纖維細胞，取3～5 代細胞用于實驗，以1×10-10～1×10-7mol/L 尾加壓素II刺激血管外膜成纖維細胞24h ，或以1×10-8 mol/L尾加壓素II 刺激血管外膜成纖維細胞8h 、12h 、24h 、48h ，或以1×10-7 mol/L尾加壓素II受體阻斷

3、劑SB-710411分別作用24h 、48h ，提取上清，用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA ）測各組上清液中TGF-β1 蛋白含量；②將細胞分為單純培養(yǎng)基對照組、UII （10 -8 mol/L ）組、TGF-β1 （20ng/mL ）組、UII （10 -8 mol/L ）+TGF-β1 （20ng/mL ）、UII （10 -8 mol/L ）+ TGF-β1特異性中和抗體（20ug/ml ）組以及TGF-β1 （20ng/mL ）+

4、SB-710411 （10 -7 mol/L ）組，培養(yǎng)24h后，用蛋白免疫印跡試驗（Western Blotting ）及實時定量PCR （Real-time PCR ）方法分別檢測α -平滑肌肌動蛋白及mRNA 表達。計量資料采用均數(shù)±標準差（x ± s ）表示，兩組間均數(shù)比較用t 檢驗，多組間均數(shù)比較用單因素方差分析，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：⑴UII以時間依賴方式促進Afs 分泌TGF-β1 ，用U

5、II（10 -8 mol/L ）分別刺激成纖維細胞8 、12 、24 、48h 后，TGF-β1分泌量隨刺激時間延長而逐漸增加，在24h 達峰，48h 呈下降趨勢，各組與對照組相比，分別增高13.86％（P<0.05 ）、36.41％（P<0.01 ）、69.82％（P<0.01 ）、30.02％（P<0.01 ），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。⑵UII以濃度依賴方式促進Afs 分泌TGF-β1 ，10 -10 mol/L 、10 -9 mol/

6、L 、10 -8 mol/L UII 刺激組分別較對照組高29.50％、41.99％、59.92％（均為P<0.01 ）、10 -7 mol/L UII 組雖略低于10 -8 UII刺激組，但仍較對照組高47.79％（P<0.01 ）。⑶UII 的促TGF-β1 分泌作用能被UII 受體阻斷劑SB-710411 所阻斷，24h 、48h 分別較UII 刺激組下降44.20％、33.33％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P<0.01)。⑶UII

7、、TGF-β1均有促進大鼠血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化的作用，α -SM–actin mRNA表達分別較空白對照組增加160.83％（P<0.01 ）、225.80％（P<0.01 ）；α -SM–actin蛋白表達分別較對照組增加18.75％（P<0.01 ）、20.87％（P<0.01 ）；⑷UII受體阻斷劑SB-710411 及TGF-β1 特異性中和抗體能抑制TGF-β1 、UII 的促α -SM–actin 表達作用，α -SM

8、–actin mRNA 表達分別較UII 及TGF-β1 組下降59.59％（P<0.01 ）、61.86％（P<0.01 ），α -SM–actin 蛋白表達分別較UII 及TGF-β1 組下降17.83％（P<0.01 ）、17.15％（P<0.01 ）；⑸UII 和TGF-β1 共同刺激組較單獨刺激組而言，α -SM–actin mRNA 表達與UII 組相比增加38.83％ (P<0.05)，與TGF-β1組比較增加11.14％