許氏平鲉微衛(wèi)星標(biāo)記開發(fā)及群體遺傳結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、許氏平鲉（Sebastes schlegelii）是我國北方重要的養(yǎng)殖和捕撈魚類之一，具有很高的經(jīng)濟價值。過度捕撈和近岸生態(tài)環(huán)境的變化使野生許氏平鲉資源逐漸減少，野生群體遺傳多樣性受到威脅。對野生群體種質(zhì)資源狀況充分了解的基礎(chǔ)上，通過合理的向天然水域投放人工繁殖苗種進行增殖放流（Stock Enhancement），可以在一定程度增加許氏平鲉資源量，保護生物多樣性。同時，從野生群體中選育出生長速度快、抗病能力強的優(yōu)質(zhì)品種進行人工養(yǎng)殖也具

2、有重要的經(jīng)濟效益和社會效益。微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)為許氏平鲉種質(zhì)資源研究和良種選育工作提供了一個方便、有效的工具。本研究采用磁珠富集法構(gòu)建許氏平鲉微衛(wèi)星富集文庫，開發(fā)出51對具有多態(tài)性的微衛(wèi)星標(biāo)記。并選用部分高多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記對山東半島五個地理群體（煙臺牟平區(qū)、長島縣，日照東港區(qū)、威海榮成市、青島膠州灣）的野生群體遺傳結(jié)構(gòu)進行評估。
　　1、許氏平鲉微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)及評價。
　　用Sau3AI對許氏平鲉基因組DNA酶切并收集400~

3、1000bp的片段，含微衛(wèi)星序列的DNA片段與生物素標(biāo)記的寡核苷酸探針(CA)12和(GA)12雜交后被鏈霉親和素包被的磁珠捕獲，然后與載體連接并轉(zhuǎn)化至DH5α感受態(tài)細胞中，構(gòu)建許氏平鲉微衛(wèi)星序列富集文庫。采用三引物PCR法對353個菌落進行了陽性克隆確認，篩選得到213個陽性克隆，重組率為60.34％。陽性克隆測序結(jié)果顯示其中188個克隆含微衛(wèi)星核心序列，占88.26%。核心序列大部分為CA/GT和GA/CT重復(fù)單元，其中完美型（Pe

4、rfect）83個，非完美型（Imperfect）47個，復(fù)合型（Compound）58個，分別占44.15%，25.00%和30.85%。
　　利用軟件設(shè)計并合成了169對微衛(wèi)星引物，其中144對引物能擴增出清晰的目的條帶。在使用32個長島野生群體個體對這些引物進行評價時有51對引物表現(xiàn)出了多態(tài)性。所有位點上共得到384個等位基因片段，每個位點的等位基因數(shù)（Na）為2～21個，平均等位基因數(shù)為7.5294；平均觀測雜合度（Ho）

5、、平均期望雜合度（He）、平均多態(tài)信息含量（PIC）分別為0.5106、0.5794和0.5443。其中高度（PIC>0.5）和中度（0.25

6、berg平衡。結(jié)果說明本研究所篩選的微衛(wèi)星標(biāo)記大部分都具有較高的多態(tài)性，可以用于許氏平鲉的遺傳相關(guān)分析。
　　2、五個許氏平鲉地理群體的遺傳結(jié)構(gòu)分析。
　　選用17對微衛(wèi)星引物分析了山東半島5個野生群體的群體遺傳結(jié)構(gòu)，采用分辨率高的毛細管電泳技術(shù)進行基因分型。每個群體所有位點平均等位基因數(shù)在14.353到14.824之間，平均觀測雜合度為0.785~0.793，平均期望雜合度為0.824～0.841，多態(tài)信息含量為0.791

7、~0.808。說明這五個群體的遺傳多樣性均較高，選擇育種的潛力大。近交系數(shù)（Fis）顯著性檢驗表明5個群體各位點的平均近交系數(shù)為0.025~0.065，榮成群體的平均近交系數(shù)最低，青島群體則出現(xiàn)了極顯著的近交現(xiàn)象（P<0.01）。5個群體之間的遺傳分化指數(shù)(Fst)為-0.0027~0.0064，青島群體與牟平、日照和榮成群體均產(chǎn)生了顯著的分化，與長島群體產(chǎn)生了極顯著的分化，但分化指數(shù)均小于0.05，表明為各群體間分化程度較低。各群體間

8、的遺傳相似性指數(shù)為0.8844～0.9350，遺傳距離為0.0672～0.1229，青島群體與各群體間的遺傳距離均大于其余各群體間的遺傳距離，遺傳相似性指數(shù)則低于其余群體間的相似性指數(shù)，榮成群體和日照群體間的遺傳相似性指數(shù)最高，遺傳距離最小。根據(jù)Nei遺傳距離采用UPGMA法構(gòu)建聚類分析圖，日照群體和榮成群體聚類后再與長島群體聚類，然后與牟平群聚為一支，青島群體單獨為一支。主成分分析結(jié)果顯示群體散點圖在第一主成分上基本呈均勻分布狀態(tài)，青