擬穴青蟹微衛(wèi)星分子標(biāo)記的發(fā)育及其群體遺傳結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、擬穴青蟹是我國沿海重要的經(jīng)濟(jì)蟹類，具有很高的商品經(jīng)濟(jì)價值，由于海域污染和人為過度捕撈等原因，導(dǎo)致資源量受到嚴(yán)重破壞。本研究采用磁珠富集法，開發(fā)了擬穴青蟹高多態(tài)微衛(wèi)星引物8對，并應(yīng)用微衛(wèi)星分子標(biāo)記技術(shù)對擬穴青蟹群體進(jìn)行遺傳多樣性和遺傳分化研究，以期為我國擬穴青蟹種質(zhì)資源的可持續(xù)利用及保護(hù)、加快良種選育提供科學(xué)依據(jù)。
　　1．采用磁珠富集法，利用生物素標(biāo)記的(GT)15、(CT)15混合寡核苷酸探針從擬穴青蟹的基因組DNA的Mse1I

2、酶切片段中篩選500～1200bp的微衛(wèi)星序列。將洗脫的雜交片段克隆到pMD18-T載體上構(gòu)建富集微衛(wèi)星基因組文庫，通過PCR篩選檢測出陽性克隆進(jìn)行測序。挑取350個克隆檢測，取130個片段大小為≥500bp克隆測序，從中設(shè)計了48對引物。以海南瓊山擬穴青蟹群體為研究對象，對引物進(jìn)行多態(tài)性檢測，共檢測出8對高多態(tài)引物，其等位基因數(shù)為2～8個，多態(tài)信息含量為0.239～0.841，觀察雜合度為0.3333～0.667，期望雜合度為0.27

3、78～0.8589。多態(tài)性分析結(jié)果顯示，8對引物均具有較高的多態(tài)性，適合進(jìn)行種群遺傳學(xué)研究。
　　2．采用8對微衛(wèi)星引物，對我國沿海擬穴青蟹10個野生群體的遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，分析了各群體內(nèi)的遺傳多樣性和10個群體間的遺傳分化。擬穴青蟹10個群體平均每位點等位基因數(shù)（A）介于3.6250～4.5000之間，平均為4.1111；平均每位點有效等位基因數(shù)（Ae）介于2.3550～2.9611之間，平均為2.6818；多態(tài)信息含量（PIC

4、）介于0.4497～0.542之間，平均為0.4971；觀察雜合度在0.3228～0.4859之間，平均為0.4215；期望雜合度在0.5042～0.6092之間，平均為0.5492。表明擬穴青蟹群體遺傳多樣性處于中等水平。群體間遺傳距離（D）介于0.011～0.1983之間,遺傳分化系數(shù)（FST）為0.0411，表明擬穴青蟹10個群體之間分化較弱。聚類分析顯示，海南四個群體遺傳距離較近先聚為一類，再與福建群體、廣東群體聚為一類，最后與