基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的大豆南、北方莖潰瘍病菌檢測技術(shù)體系.pdf

1、大豆莖潰瘍病是大豆生產(chǎn)上的重要病害。大豆莖潰瘍的病原菌分為大豆南方莖潰瘍病菌[Diaporthe phaseolorum(Cke.& Ell.) Sacc.var.meridionalis Morgan-Jones](簡稱DPM)和大豆北方莖潰瘍病菌[Diaporthe phaseolorum var.caulivora]（簡稱DPC）。大豆南、北方莖潰瘍病菌都屬于子囊菌亞門、球殼目、間座殼科、間座殼屬，無性階段均為擬莖點(diǎn)霉屬。能與大豆

2、莖莢枯病菌和大豆擬莖點(diǎn)種腐病菌共同引起間座殼—擬莖點(diǎn)綜合癥，危害非常嚴(yán)重。由DPM和DPC分別引起的大豆南方莖潰瘍病和大豆北方莖潰瘍病在我國還未有發(fā)生的報(bào)道，這兩種病害均為我國口岸的檢疫病害。
　　由于我國對大豆的需求量越來越大，而進(jìn)口大豆中除大豆種子以外還混雜有豆莢、豆稈、碎葉片、以及田間的泥塊等殘?jiān)?，若這些成分中含有活著的大豆南、北方莖潰瘍病菌，則很有可能由于目前口岸對這兩種病原菌的檢測技術(shù)較為落后而造成檢測漏洞。若不能及時(shí)發(fā)

3、現(xiàn)和阻止帶菌大豆入境，使這兩種病原菌在我國定殖、傳播和危害，將會(huì)對我國的大豆生產(chǎn)產(chǎn)生嚴(yán)重影響。
　　目前我國口岸對大豆南、北方莖潰瘍病菌的檢測技術(shù)還不是十分成熟，即使可以檢測，也要花費(fèi)較長時(shí)間，并且對人力、物力、所需儀器、實(shí)驗(yàn)條件等也有很高的要求。而口岸檢疫最重要的一點(diǎn)就是病原菌的快速、準(zhǔn)確的診斷。為此，本實(shí)驗(yàn)主要是基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)建立

4、一種口岸DPM、DPC快速檢測的技術(shù)體系。該技術(shù)體系由本實(shí)驗(yàn)室鄭小波、沈浩等研發(fā)。
　　由于進(jìn)境的大豆殘?jiān)鼧颖局泻卸骨v、豆稈、碎葉片、多種微生物及田間的泥塊等成分，那么該LAMP技術(shù)是否能在這些影響因素存在的情況下，準(zhǔn)確的檢測出材料中的DPM、DPC呢？所以我們首先在實(shí)驗(yàn)室條件下，采用向一定量的江蘇省出入境檢驗(yàn)檢疫局提供的不含有DPM、DPC的大豆殘?jiān)鼧颖局屑尤氩煌瑵舛忍荻鹊腄PM、DPC的孢子的方法對LAMP檢測DPM、DPC

5、的靈敏度進(jìn)行研究?；贚AMP的DPM、DPC的檢測靈敏度越高就越有利于提高在口岸檢疫這兩種病菌的檢出效率。我們最終確定了在實(shí)驗(yàn)室條件下應(yīng)用該LAMP技術(shù)檢測DPM、DPC的靈敏度，分別為10～50個(gè)孢子/10g大豆殘?jiān)?～10個(gè)孢子/10g大豆殘?jiān)?br>　　在確定了在實(shí)驗(yàn)室條件下研發(fā)的該LAMP的DPM、DPC快速分子檢測隨技術(shù)可應(yīng)用于口岸截獲的大豆殘?jiān)鼧颖镜臋z測后，我們就對江蘇省出入境檢驗(yàn)檢疫局提供的口岸截獲的11份大豆殘?jiān)鼧?/p>

6、本進(jìn)行DPM、DPC的LAMP實(shí)際檢測。檢測出該11份豆渣樣本中有3份攜帶有DPC、均未攜帶DPM。
　　病菌的傳播是建立在活體的基礎(chǔ)上。江蘇省出入境檢驗(yàn)檢疫局提供的11份大豆殘?jiān)鼧颖具M(jìn)行DPM、DPC的LAMP檢測后，對DPC檢測結(jié)果為陽性的有3份豆渣樣本。但并不清楚是否含有DPC活菌。所以，我們對該3份大豆殘?jiān)鼧颖局袛y帶的DPC進(jìn)行分離、純化。最后從2號（巴西，201304005）大豆殘?jiān)鼧颖局蟹蛛x出了DPC。
　　本實(shí)