掌腱膜攣縮的細(xì)胞凋亡研究.pdf

1、目的：掌+膜攣縮癥（Dupuytren's Disease）是以掌腱膜增生、收縮引起手指屈曲攣縮為特征的一種病癥，流行于北歐及其他歐美地區(qū)，在東方人種和黑色人種中較少見，隨著我國人口老齡化趨勢的發(fā)展，掌腱膜攣縮癥的發(fā)病率明顯增高。170多年來對于該病的發(fā)病原因的探究一直是醫(yī)學(xué)界關(guān)心的熱門課題，國外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)肌纖維母細(xì)胞對于掌腱膜攣縮癥病程發(fā)展和復(fù)發(fā)發(fā)揮關(guān)腱作用，且掌腱膜攣縮癥晚期退化期發(fā)生凋亡的細(xì)胞仍是肌纖維母細(xì)胞。最新的研究集中于肌

2、纖維母細(xì)胞為何在正常愈合的傷口中會自行消失，而纖維增生和纖維增殖性疾病中卻能長期存在下去。其解釋在于對肌纖維母細(xì)胞凋亡（apoptosis），即程序性細(xì)胞死亡的控制出現(xiàn)了問題。凋亡的具體誘導(dǎo)者不清楚，有人提出是某些基因，如ced-3，c-Myc，其他還有一些控制凋亡的生成因子，如轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor-R，TGF-R），血小板源性生長因子（R-platelet-derived growth f

3、actor，PDGF），腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）等。
　　 國人掌腱膜攣縮癥的病因?qū)W、病理學(xué)方面研究較少，基于上述國外研究基礎(chǔ)，我們對掌腱膜攣縮癥的細(xì)胞凋亡機(jī)制進(jìn)行了深入研究。本研究的目的在于通過光鏡、電鏡觀察來了解國人掌腱膜攣縮癥的病理特點(diǎn)，通過Tunel法（原位末端標(biāo)記術(shù)）在光鏡下觀察掌腱膜攣縮的凋亡細(xì)胞，并與免疫組化結(jié)合來觀察bcl-2/bax凋亡基因的表達(dá)，探討bcl-2/bax

4、基因所誘導(dǎo)的凋亡對掌腱膜攣縮病理發(fā)展過程中的影響，為進(jìn)一步的研究打好基礎(chǔ)，也為臨床治療提供新的思路。
　　 方法：我科自2006年至2008年共收治掌腱膜攣縮癥共24例26只手，其中病變組標(biāo)本取自其中行手術(shù)治療時獲取的病變掌腱膜組織。所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)檢查確診。正常掌腱膜標(biāo)本共21例，其中15例取自外傷性截肢而手腕部未損傷的手掌，3例取自腕部手術(shù)延伸切口時獲取之掌腱膜，3例掌腱膜取自新鮮尸體。對病變及正常的掌腱膜行HE染色、免疫

5、組織化學(xué)染色和TUNEL法標(biāo)記染色，光鏡觀察和透射電鏡觀察；并對掌腱膜攣縮的病變組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，光學(xué)顯微鏡下觀察Bax/Bcl-2陽性細(xì)胞和凋亡細(xì)胞在正常及病變的掌腱膜組織中的分布情況，計算兩組的Bax/Bcl-2陽性細(xì)胞染色的平均光密度值（OD）值和凋亡指數(shù)，透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)變化。所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
　　 結(jié)果：1.光鏡觀察：正常掌腱膜組織：Ⅰ型膠原呈層狀或線狀分布于基質(zhì)中，較均勻；纖維細(xì)胞細(xì)長。平行排列

6、，有規(guī)則。Ⅲ型膠原呈條狀或絲狀分布于基質(zhì)中，較均勻，有輕度濃聚現(xiàn)象；纖維細(xì)胞細(xì)長。平行排列。（見附圖1）
　　 病變掌腱膜組織中：Ⅰ型膠原呈條狀分布，不均勻，數(shù)量相對變少，纖維細(xì)胞較密集，排列不整齊。Ⅲ型膠原呈條狀、片狀或網(wǎng)狀分布，纖維細(xì)胞較短，局部濃聚；纖維細(xì)胞較密集，排列不整齊，數(shù)量增多。
　　 2.電鏡觀察：病變掌腱膜組織中：線粒體部分融合，數(shù)量不清，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，有脫顆?，F(xiàn)象。細(xì)胞長梭形，核呈橢圓形，核染色質(zhì)電

7、子密度增加，邊集于核膜下，厚度不均。線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)同上，核旁細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見一個高爾基復(fù)合體。
　　 3.按原位末端標(biāo)記法測得的凋亡指數(shù)（AI）=凋亡細(xì)胞核數(shù)/總細(xì)胞核數(shù)計算，本實驗得出的結(jié)果掌腱膜攣縮組（A組）的凋亡指數(shù)高于正常掌腱膜組（B組），統(tǒng)計學(xué)分析有顯著性差異，（P<0.05）。
　　 4.免疫組織化學(xué)檢測：對掌腱膜攣縮組（A組）、正常掌腱膜組（B組）兩組行免疫組織化學(xué)檢測后得出兩組的Bax/Bcl-2陽性細(xì)胞