甘草有益微生物的分離、鑒定及共接種效果初探.pdf

1、本論文以內(nèi)蒙古和青海省人工栽培的烏拉爾甘草為材料,研究甘草內(nèi)生細(xì)菌分布的多樣性.同時(shí),還對(duì)內(nèi)蒙古栽培甘草的根瘤菌和VA菌根進(jìn)行了分析,并對(duì)內(nèi)生細(xì)菌、根瘤菌、VA菌根的共接種效果進(jìn)行了初步探討,結(jié)果如下: 1、對(duì)內(nèi)蒙古一年生、兩年生和三年生烏拉爾甘草、青海兩年生烏拉爾甘草健康植株根、莖、葉等組織中的內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行了分離和數(shù)量測定,共分離出細(xì)菌146株.結(jié)果表明,甘草根、莖、葉等組織內(nèi)存在大量內(nèi)生細(xì)菌,不同組織中內(nèi)生細(xì)菌的分布密度不同

2、.不同地域、不同年份甘草組織中內(nèi)生細(xì)菌分布密度也存在較大差異.通過鏡檢觀察芽孢桿菌是分離的優(yōu)勢菌,約占30﹪,實(shí)驗(yàn)中還分離到了黃單孢菌屬(Xanthomonas)、假單孢菌屬(Pseudomonas)、類芽孢桿菌屬(paenibacillus)及短小桿菌屬(Curtobacterium).采用ERIC-PCR分析方法,發(fā)現(xiàn)甘草內(nèi)生細(xì)菌存在特異的擴(kuò)增條帶,能夠分辨出不同地區(qū)來源、不同組織中菌株的差異,說明甘草中內(nèi)生細(xì)菌存在著豐富的多樣性.

3、 2、在PDA平板上測定了146株內(nèi)生細(xì)菌菌株對(duì)西瓜枯萎病菌和煙草赤星病菌等15種病原菌的體外拮抗活性.共有23株內(nèi)生細(xì)菌對(duì)一種或幾種病原菌具有不同程度的拮抗活性,其中6株內(nèi)生細(xì)菌對(duì)這些病原菌表現(xiàn)出較好的抑菌活性,對(duì)15種病原菌的抑制半徑幾乎都達(dá)到了7mm以上,特別是IS5對(duì)黃瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌的抑制半徑都達(dá)到了13.0mm,抑菌率達(dá)到65﹪,對(duì)病原菌的擴(kuò)展具有明顯的抑制作用.同時(shí),IIL15菌株的培養(yǎng)濾液在DPA平板上抑

4、制煙草赤星病菌和小麥紋枯病菌的生長,產(chǎn)生透明的抑菌圈,這說明細(xì)菌在生長代謝過程中產(chǎn)生了具有抑菌活性的抗生物質(zhì),抑制了真菌抱子的萌發(fā).經(jīng)常規(guī)的生理生化鑒定、Biolog微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)鑒定、16s rDNA序列分析,將6株拮抗菌分別鑒定為萎縮芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、多粘類芽孢桿菌(paenibaciUus polyyxa)和Paenibacillus ehi

5、mensis. 3、從不同年份甘草根瘤中共得到54個(gè)根瘤培養(yǎng)物,經(jīng)菌落形態(tài)及鏡檢發(fā)現(xiàn)這些菌具有根瘤菌屬的特征.采用ERIC-PCR分析方法,發(fā)現(xiàn)甘草根瘤菌存在特異的擴(kuò)增條帶,能夠分辨出從不同年份植株上分離的根瘤菌的差異,說明甘草根瘤菌存在著豐富的多樣性.在用根瘤菌回接甘草中,液體培養(yǎng)結(jié)瘤數(shù)多于半固體培養(yǎng)的,且根瘤較半固體培養(yǎng)的大.對(duì)結(jié)瘤效果好的菌株進(jìn)行克隆測序,并分析序列比對(duì)結(jié)果,發(fā)現(xiàn)R31與Mesorhizobium temp

6、eratum(T)AF508208、R50與Mesorhizobium mediterraneum(T)L38825相似性都為99﹪,屬于中慢生根瘤菌屬. 4、分離甘草的VA菌根,并用三葉草進(jìn)行單孢繁殖,將繁殖后的菌根回接甘草.接種了菌根的甘草植株莖長、根粗、莖葉干重和根干重都有較大程度的提高,均比對(duì)照顯著增加,并且不同處理對(duì)植株生長影響不同.可見接種VA菌根真菌顯著促進(jìn)了甘草的營養(yǎng)生長.將根瘤菌、內(nèi)生細(xì)菌和菌根共接種甘草,實(shí)驗(yàn)