柑橘炭疽病菌拮抗微生物的篩選、鑒定及防病效果研究.pdf

1、由于柑橘成熟后代謝旺盛，病原微生物的潛伏侵染，造成了流通過程中較大損耗，嚴(yán)重制約了柑橘產(chǎn)業(yè)發(fā)展。由膠孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Pcnz.)Sacc.]侵染引起的柑炭疽病(citrus anthracnose)是柑橘采后的主要病害之一。目前，防治柑橘采后病害多采用化學(xué)殺菌劑處理的方法，該方法會(huì)引起產(chǎn)品污染以及危害人體安全。此外，經(jīng)常使用一種化學(xué)殺菌劑處理采后的柑橘，柑橘采后病害的病菌對該化學(xué)藥

2、劑抗會(huì)產(chǎn)生抗性，導(dǎo)致防病效果下降。因此，迫切需要開發(fā)新的高效、環(huán)保、無毒的生物保鮮劑，以取代或減少化學(xué)殺菌劑在柑橘采后保鮮中的使用。
　　 本研究從不同環(huán)境中分離篩選出有效防治柑橘采后炭疽病的拮抗菌的基礎(chǔ)上，對拮抗菌進(jìn)行分類鑒定，并初步探討其拮抗機(jī)理，以期為利用生物防治方法控制柑橘采后病害提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1．從不同作物的根、莖、葉、果及根際土壤中共分離到了571株菌株，從中篩選出對柑橘炭疽病有較好抑制

3、效果的4株拮抗細(xì)菌(T132、T226、1404、1505)。根據(jù)形態(tài)學(xué)特征、生理生化反應(yīng)和16S rDNA測定結(jié)果，將菌株T132鑒定為越南伯克霍爾德氏菌（Burkholderia vietnamiensis），菌株T226鑒定為產(chǎn)酶溶桿菌(Lysobacterenzymogenes)，菌株1404鑒定為短短芽孢桿菌（Brevibacillus brevis），菌株1505鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。

4、r>　　 2．采用柑橘果實(shí)刺傷挑戰(zhàn)接種和拮抗菌液直接浸泡健康果實(shí)兩種方法研究拮抗菌對柑橘炭疽病的抑菌防病效果。結(jié)果表明，無論是刺傷接種還是直接浸泡，4株拮抗菌都能較好地控制采后柑橘炭疽病的為害。刺傷接種試驗(yàn)中，柑橘室溫貯藏20 d后，拮抗菌菌株T132、T226、1404、1505對炭疽病防效依次為88.2％、78.2％、64.9％、52.1％，而陽性對照咪鮮胺（濃度200 mg/L）的防效為85.7％，低于菌株T132的防效。直接浸

5、泡試驗(yàn)表明，在室溫下貯藏60 d，菌株T132和T226的防效分別為54.9％和61.3％，分別比咪鮮胺的防效(49.1％)高5.8和12.2個(gè)百分點(diǎn)；菌株1404與1505防效雖然不及咪鮮胺，但使用后病情明顯輕于對照。
　　 3．測定拮抗菌株代謝產(chǎn)物的抑菌活性，結(jié)果表明：4株拮抗菌的發(fā)酵原液都能不同程地抑制柑橘炭疽菌的生長，但其121℃高溫滅菌發(fā)酵液都無拮抗活性；菌株T132、T226與1404的去菌體發(fā)酵液對柑橘炭疽菌有一定

6、的拮抗活性，而菌株1505的去菌體發(fā)酵液無拮抗活性。對拮抗菌株產(chǎn)酶能力測定結(jié)果表明：4株拮抗菌都能產(chǎn)生蛋白酶；除了菌株1404以外，其它3株拮抗菌(T132、T226、1505)均分泌纖維素酶：4株拮抗菌均不產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶。采用對峙培養(yǎng)法測定了拮抗菌株對柑橘炭疽菌菌絲生長的影響，通過顯微鏡觀察，菌株T132、1404與1505對炭疽菌菌絲的生長均引起菌絲不同形態(tài)的畸形、原生質(zhì)凝結(jié)、內(nèi)含物外溢等現(xiàn)象；菌株T226不引起柑橘炭疽菌的菌絲發(fā)生畸