山金柑純系及遺傳轉(zhuǎn)化平臺構(gòu)建.pdf

1、柑橘中的金柑屬在我國栽培歷史悠久，是柑橘中重要的種質(zhì)資源之一。山金柑（Fortunella hindsii Swingle）屬于金柑屬，是蕓香科常綠野生果樹，其植株矮小，童期短，實生苗一至兩年便可開花結(jié)果，且有單胚和多胚兩種類型，是理想的研究材料，有望作為柑橘果樹的模式植物。本研究以野生單、多胚山金柑為主要研究材料，嘗試花藥培養(yǎng)和常規(guī)育種方法獲得山金柑純系，通過SSR檢測分析不同個體、不同世代山金柑的純合度差異，并比較了不同株系山金柑以

2、及不同培養(yǎng)方式對山金柑再生和轉(zhuǎn)化效率的影響，對其轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了優(yōu)化。主要研究結(jié)果如下:
　　1.2012年和2013年對種植在華中農(nóng)業(yè)大學(xué)柑橘資源圃的單胚山金柑進(jìn)行連續(xù)的花期套袋，使其自交，得到自交材料的S1代、S2代。對其進(jìn)行SSR進(jìn)行分析，共采用了分布于9條染色體上的31對標(biāo)記，分析其純合度。目前獲得純合度最高的植株可達(dá)到93.5％;另外對S2代所有樣品的標(biāo)記位點(diǎn)在群體中的純合度情況進(jìn)行了分析，9條染色體中平均純合度最高的為6

3、號染色體，其次為3號和5號染色體。
　　2.S2代中編號為34、35、36、48、49的植株已經(jīng)開花，繼續(xù)對其進(jìn)行自交，獲得自交種子，播種后獲得S3代。
　　3.對不同世代間山金柑純合度分析結(jié)果表明，自交后代個體純合度并不一定高于親代，但其整體純合度呈增加趨勢。隨著其純合度增加，植株生活力表現(xiàn)出下降趨勢，這種現(xiàn)象是否與自交衰退有關(guān)還需進(jìn)一步研究。
　　4.在2013年和2014年6月至10月期間以單、多胚山金柑花藥為材

4、料，培養(yǎng)花藥10000枚以上，僅有1/2MT+0.1 mg/L NAA+活性炭的培養(yǎng)基上有少量愈傷組織長出。
　　5.選取12個不同地區(qū)采集的山金柑株系為材料，對遺傳轉(zhuǎn)化主要影響因子設(shè)置不同梯度，利用熒光顯微鏡觀察抗性芽，計算生芽率和陽性率，比較不同處理下山金柑的再生率和轉(zhuǎn)化率。結(jié)果顯示，選用QK、ZQ、GZ等基因型的外植體，黃化苗光培10d左右，共培養(yǎng)后暗培養(yǎng)5-7d，農(nóng)桿菌液OD值在0.7左右，是山金柑較為適宜的遺傳轉(zhuǎn)化條件。