質子泵抑制劑與抗生素的聯(lián)合抗菌作用及hefA基因表達與幽門螺桿菌多重耐藥關系的研究.pdf

1、目的:了解抗生素和質子泵抑制劑聯(lián)合應用對幽門螺桿菌（Helicobacter pylori,Hp）的聯(lián)合抗菌效應；了解外膜蛋白編碼基因 hefA（outer-membrane protein hefA gene）表達與貴陽市Hp多重耐藥的關系。
　　方法1、采用界值法檢測Hp臨床菌株對克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林的敏感性，選取Hp克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林敏感菌株（n=5）和耐藥菌株（n=5），采用棋盤格法檢測三種抗生素分別

2、與兩種質子泵抑制劑（奧美拉唑、雷貝拉唑）聯(lián)合應用對Hp的最低抑菌濃度（MIC），通過公式計算FIC指數(shù)（Fractional inhibitory concentration Index，F(xiàn)ICI），判斷藥物聯(lián)合抗菌效應；比較奧美拉唑和雷貝拉唑分別與三種抗生素聯(lián)合應用時的FICI，采用兩小樣本t檢驗的方法進行統(tǒng)計學處理。
　　2、提取耐三種抗生素的多重耐藥菌株（n=10）、敏感菌株（n=6）及質控菌株 SS1的基因組DNA，PCR

3、擴增hefA基因片段，將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，并測序，將測序的基因序列輸入NCBI中進行BLAST比對；利用TRIzol試劑提取上述細菌的RNA，逆轉錄成cDNA，以16sRNA為內參基因，通過實時熒光定量PCR（Real time PCR）檢測hefA基因和內參基因的CT值，通過比較2-ΔΔCt判斷多重耐藥菌株和敏感菌株 hefA基因表達的差異，以兩小樣本 t檢驗進行統(tǒng)計學處理。
　　結果:1、本實驗分離的69株Hp

4、菌株中同時對克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林耐藥的多重耐藥株為15株，多重耐藥率達到21.7％（15/69）。
　　2、克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林分別與奧美拉唑、雷貝拉唑配伍對敏感菌株和耐藥菌株的聯(lián)合抗菌作用FICI均小于0.75；雷貝拉唑和左氧氟沙星對敏感菌株的聯(lián)合抗菌試驗 FICI比奧美拉唑和左氧氟沙星的聯(lián)合抗菌試驗的FICI?。≒=0.035＜0.05，兩小樣本t檢驗），奧美拉唑和雷貝拉唑分別與克拉霉素或阿莫西林聯(lián)合抗菌試

5、驗的FICI沒有顯著的差異（P=0.545和0.156＞0.05，兩小樣本t檢驗）；雷貝拉唑和阿莫西林對耐藥菌株的聯(lián)合抗菌試驗 FICI比奧美拉唑和阿莫西林的聯(lián)合抗菌試驗的FICI?。≒=0.012＜0.05，兩小樣本t檢驗），雷貝拉唑和奧美拉唑分別與左氧氟沙星或克拉霉素聯(lián)合抗菌試驗的FICI沒有顯著差異（P=0.789和0.461＞0.05，兩小樣本t檢驗）。
　　3、hefA基因的PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳顯示，6株敏感菌和1

6、0株多重耐藥菌及質控SS1菌均有約140bp的擴增產物，測序結果顯示均為幽門螺桿菌的hefA基因；通過Real-time PCR在敏感株和多重耐藥株中均檢測出hefA外排基因的表達，在敏感株中2-ΔΔCt為0.895±0.540，多重耐藥株中2-ΔΔCt為3.387±1.597，多重耐藥株表達量顯著高于敏感株（P=0.001＜0.05,兩小樣本t檢驗）。
　　結論:
　　1、奧美拉唑或雷貝拉唑分別與克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫