兒童幽門螺桿菌抗生素耐藥相關基因的研究.pdf

1、幽門螺桿菌(helicobacter pylori，Hp)不僅是成人慢性胃炎、十二指腸潰瘍、胃癌、胃黏膜相關淋巴組織瘤等疾病的重要致病因素，而且與兒童慢性胃炎、十二指腸炎、消化性潰瘍的發(fā)生發(fā)展密切相關。Hp感染是一個全球性的問題，全世界人群感染率為50％。根除Hp已被證明可以減少胃癌的發(fā)病率，提高潰瘍愈合。但由于治療中抗生素的不合理應用導致抗生素的耐藥，成為根除治療Hp失敗的主要原因。針對Hp目前廣泛使用的治療方案包括標準三聯(lián)療法，包括

2、克拉霉素，阿莫西林、滅滴靈這三種主要的抗生素。最近的研究表明，潛在的抗生素耐藥性主要是由于Hp的遺傳基因突變。因此，檢測耐藥的Hp的基因突變，可以避免兒童抗生素濫用以及之后的多次耐藥。本研究旨在初步了解兒童Hp耐藥情況，并對一些抗生素的耐藥基因進行研究。既往的耐藥研究中大多采用基于培養(yǎng)基的敏感性測試，但它們不能確定具體的基因型。隨著快速基因測序技術的發(fā)展，應用PCR來檢測Hp，更具有指導意義。本論文采用PCR的方法，研究兒童Hp耐藥菌株

3、和敏感菌株之間的遺傳基因突變情況，以明確克拉霉素，滅滴靈和左氧氟沙星耐藥Hp菌株的基因信息。
　　目的:
　　研究兒童Hp耐藥株耐藥特性與相關基因突變的聯(lián)系，為兒童耐藥Hp的進一步研究提供一定的理論依據(jù)。
　　方法:
　　從兒童胃黏膜樣本中分離培養(yǎng)80株Hp為出發(fā)菌株，用PCR的方法分別擴增敏感和耐藥株的相關耐藥基因，其中克拉霉素耐藥株擴增23S rDNA上約280bp片段;滅滴靈耐藥株擴增rdxA和frxA基因

4、部分序列，左氧氟沙星耐藥株擴增gyrA和gyrB基因部分序列。通過DNA測序和生物信息學分析相關基因的突變情況，研究基因突變與耐藥特性的內(nèi)在聯(lián)系。
　　結果:
　　80例Hp菌株中，克拉霉素耐藥29株，耐藥比例達到36.2％，相關耐藥基因23S rDNA突變呈無規(guī)則狀態(tài)，A2056G、T2095 C和T2157C三個突變點出現(xiàn)頻率最高，分別達到90％、93％和100％，但是在敏感株中同樣出現(xiàn)了這些點突變。滅滴靈耐藥58株，耐

5、藥比例72.5％，相關基因rdxA出現(xiàn)以G47A和T184G為主的突變點，個別菌株中出現(xiàn)G60A、C273T和C49T突變點，敏感株中同樣出現(xiàn)了T184G突變點，但未見G47A的突變點;frxA基因在敏感株和耐藥株中均出現(xiàn)了A48G突變點。左氧氟沙星耐藥12株，耐藥比例為15％，耐藥株gyrA基因出現(xiàn)的D91Y突變未在敏感株中發(fā)現(xiàn)，而在敏感株和耐藥株中均出現(xiàn)了N87K突變和無義突變。
　　結論:
　　克拉霉素耐藥Hp的23S