HBx在乙肝相關(guān)性肝癌中的表達(dá)與臨床意義及其調(diào)控組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SMYD3表達(dá)的機(jī)制研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文HBx在乙肝相關(guān)性肝癌中的表達(dá)與臨床意義及其調(diào)控組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SMYD3表達(dá)的機(jī)制研究姓名：洪清琦申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：王捷20100524HBx在乙肝相關(guān)性肝癌中的表達(dá)與臨床意義及其調(diào)控組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SMYD3表達(dá)的機(jī)制研究達(dá)情況，將HBx與SMYD3的表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)性分析，并應(yīng)用RNA干擾技術(shù)沉默HBx的表達(dá)后檢測(cè)SMYD3的表達(dá)情況及細(xì)胞組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶(H3K4)活性的變化，應(yīng)用基因轉(zhuǎn)

2、染技術(shù)瞬時(shí)上調(diào)HBx的表達(dá)后再檢測(cè)SMYD3表達(dá)的情況及細(xì)胞組蛋白甲摹轉(zhuǎn)移酶(H3K4)活性的變化，明確HBx與SMYD3的關(guān)系。3進(jìn)一步應(yīng)用染色質(zhì)免疫沉淀、免疫共沉淀、DNA蛋白質(zhì)沉淀技術(shù)篩選出HBx作用于SMYD3基因調(diào)控區(qū)域的片段，明確HBx與RNA多聚酶II的相互作用，對(duì)比HBx陽(yáng)性與陰性腫瘤細(xì)胞中HBx及RNA多聚酶II對(duì)SlffYD3基因調(diào)控區(qū)域作用位點(diǎn)的變化情況，應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)篩選出HBx作用的片段中可能存在的HB

3、x的頓式作用元件，明確HBx調(diào)控SMYD3表達(dá)的具體機(jī)制。結(jié)果：1肝癌組織中HBx蛋白質(zhì)的總體陽(yáng)性檢出率為27／41(6585％)，其中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)或乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)陽(yáng)性者HBx的陽(yáng)性率為20／25(8000％)，而HBsAg及HBeAg均為陰性者HBx的陽(yáng)性率為7／16(4375％)；HBx陽(yáng)性與HBx陰性者腫瘤組織低分化比例分別為11／27(4074％)及2／14(1429％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

4、(pO01)，且腫瘤組織低分化比例隨HBx陽(yáng)性表達(dá)程度的增加而增加，HBx強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)者腫瘤組織低分化比例高達(dá)4／6(6667％)；RTPCR對(duì)肝癌腫瘤組織HBx信使RNA(mRNA)的檢出率為10／16(625096)，PCR對(duì)肝癌患者血清中的ttBx拷貝的檢出率為1／7(1429％)，而Westernblot對(duì)肝癌患者血清中的HBx蛋白的檢出率則高達(dá)6／7(8571％)；對(duì)HBx陽(yáng)性及陰性肝癌患者進(jìn)行KaplanMeier牛存分析，并

5、用Logrank檢驗(yàn)兩組病例無(wú)病牛存期(DFS)的差異，結(jié)果提示：HBx陽(yáng)性組的無(wú)病生存期(DFS)明顯短于HBx陰性組(p=O032)。2SMYD3在肝癌組織中的總體陽(yáng)性表達(dá)率為19／41(4634％)，HBx陽(yáng)性表達(dá)的肝癌組織中SMYD3的陽(yáng)性率為19／27(7037％)，而HBx陰性表達(dá)的肝癌組織中則檢測(cè)不到SMYD3的表達(dá)，x2檢驗(yàn)提示兩者的表達(dá)呈明顯的正相關(guān)(pO05，r=O45)；RNA干擾沉默HBx的表達(dá)可以在mRNA及蛋