S-腺苷甲硫氨酸高產(chǎn)菌株的選育與發(fā)酵工藝的優(yōu)化.pdf

1、S腺苷甲硫氨酸(簡稱SAM)，是生物體內(nèi)重要的中間代謝體，具有轉(zhuǎn)甲基、轉(zhuǎn)硫、轉(zhuǎn)氨丙基等作用，是半胱氨酸、牛磺酸、谷光甘肽、輔酶A等重要物質(zhì)的前體。能治療神經(jīng)紊亂、精神抑郁、關(guān)節(jié)炎等多種疾病，有著巨大的國際市場需求。 本文對(duì)SAM產(chǎn)生菌進(jìn)行了選育并開展發(fā)酵工藝研究，結(jié)果如下： 通過對(duì)S-腺苷甲硫氨酸生產(chǎn)菌SaccharomycescerevisiaeB9菌株進(jìn)行分離復(fù)壯，獲得一株遺傳性能較為穩(wěn)定的菌株SAM-39＃(1.7

2、65g/L)，以SAM-39＃為出發(fā)菌株進(jìn)行誘變育種，最后獲得比出發(fā)菌株SAM-39＃產(chǎn)量高69.89％的誘變株YZ-33，其SAM含量為3.001g/L，而紫外誘變、原生質(zhì)體再生育種方法提高產(chǎn)量的效果不明顯。通過比較發(fā)現(xiàn)：紫外線-氯化鋰復(fù)合誘變和原生質(zhì)體紫外復(fù)合誘變對(duì)SAM生產(chǎn)菌的誘變效果較好。 以高產(chǎn)穩(wěn)定的誘變株YZ-33為出發(fā)菌株，通過測定生長曲線，探索蝸牛酶的酶解濃度、時(shí)間、溫度等因素對(duì)原生質(zhì)體形成的影響，確定了制備原生

3、質(zhì)體的最佳條件為：種子液培養(yǎng)16h，0.1％β-巰基乙醇預(yù)處理10min，酶解濃度2.5％，酶解時(shí)間150min，用0.5mol/L的蔗糖作為滲穩(wěn)劑。 針對(duì)YZ-33菌株在不改變?cè)信囵B(yǎng)基組成成分的基礎(chǔ)上，對(duì)其各組成成分進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)，找到最佳配比。得出最佳培養(yǎng)基配方為：蔗糖12％、氯化銨0.8％，酵母粉0.8％，硫酸鎂0.005％,L-甲硫氨酸1.2％，磷酸二氫鉀0.4％，磷酸氫二鉀0.2％。另外，對(duì)菌株YZ-33搖瓶發(fā)酵過程

4、中的pH值、生物量、SAM含量、蔗糖含量、NH4+等代謝參數(shù)進(jìn)行測定，為SAM發(fā)酵工藝的建立提供了參考。 還對(duì)補(bǔ)料工藝做了初步的研究，確定了補(bǔ)料工藝與最適宜補(bǔ)料方式。初步補(bǔ)料工藝為：L-Met補(bǔ)料終濃度0.8％，補(bǔ)料起始時(shí)間24h，蔗糖補(bǔ)料終濃度10％，補(bǔ)料時(shí)間48h；最適宜補(bǔ)料方式為：在24h加入0.6％L-Met、3％蔗糖，在48h按0.2％補(bǔ)加L-Met，蔗糖在48h和72h分別按2.5％補(bǔ)給。在此種補(bǔ)料條件下SAM的產(chǎn)量