PC-1特異性區(qū)段分析與功能研究及紅麻油脂CLA抗癌功能初步探討.pdf

1、PC—1基因定位于前列腺癌最常發(fā)生擴增的染色體8q21．1基因座，是周建光研究員發(fā)現并克隆的前列腺癌相關基因，其產物屬于TPD52蛋白家族，N端46個氨基酸是其所特有。PC—1是一個雄激素應答基因，在AR(androgen，receptor)陽性與陰性的前列腺癌細胞系中均有表達，并隨著臨床分級和細胞惡性程度的增加而表達升高。前期研究表明，PC—1具有轉錄因子的特征并能促進前列腺癌細胞的增殖和雄激素非依賴的生長。紅麻油脂是以亞油酸為主要成

2、分的、安全的使用油脂，經精煉、催化后其主要成分可轉變?yōu)镃LA。CLA在動物和植物界中廣泛存在，是必需脂肪酸亞油酸酸9，12—18：2(LA)衍生的共軛雙烯酸，對人的生理功能具有重要意義。國內外大量的研究表明，CLA對多種腫瘤具有明顯的抑制作用。鑒于此，我們運用了一系列實驗方法，對PC—1的特異性片段和紅麻油脂CLA的抗癌功能進行研究，并取得以下結果：
　　 1、通過重疊PCR等分子克隆技術構建不同的融合綠色熒光蛋白的PC—1截短

3、體、突變體的pEGFP載體，讓其在前列腺癌細胞系LNCaP中表達，熒光顯微鏡下發(fā)現，PC—1定位細胞質的大小極限應該在111～114個氨基酸殘基左右，同時PC—1分子的103～114位氨基酸對其亞細胞定位十分重要，但不是出核序列。
　　 2、運用同源重組技術，經過穿梭載體構建、酶切線性化、體外細菌重組等步驟構建了pAd—EGFP，pAd—EGFP—PC11—46、pAd—EGFP—PC—147—224、pAd—EGFP—PC—1

4、等重組腺病毒載體，為研究PC—1片段功能提供了先決條件。
　　 3、平板克隆和westerblot實驗證明，CLA在體外具有抑制癌細胞生長的能力，并且能夠降低前列腺癌細胞C4—2中的AKT磷酸化水平。
　　 本研究中，我們發(fā)現了對PC—1亞細胞定位有重要影響的氨基酸序列和成功的構建了用于PC—1片段功能研究的腺病毒載體，為今后PC—1的研究積累基礎。同時，我們發(fā)現紅麻油脂CLA在體外抑制多種癌細胞的生長，提示其在藥用或保