柱花草防御酶活性變化、PAL基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、柱花草(Stylosanthesspp.)是一種優(yōu)良的熱帶豆科牧草。目前，柱花草己在我國(guó)華南熱帶、亞熱帶地區(qū)進(jìn)行了大面積種植和推廣。然而，柱花草炭疽病(Styloanthracnose)的發(fā)生和流行限制了柱花草的進(jìn)一步利用。Mineirao柱花草是一種高度抗炭疽病的品種，已在巴西得到了大面積的推廣種植，有關(guān)研究人員已經(jīng)對(duì)Mineirao柱花草的抗病機(jī)理進(jìn)行了初步研究，從中克隆出MSRA基因，但目前對(duì)Mineirao柱花草抗病機(jī)理尚不清楚

2、。 利用植株葉片接種技術(shù)對(duì)抗病Mineriao、感病CIAT2312柱花草接種炭疽病病原菌，對(duì)葉片中的3種酶PAL、PPO、SOD的活性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，接種后兩種柱花草種質(zhì)3種酶活性均先升后降，抗病品種增加高于感病品種，這三種酶的活性與柱花草對(duì)炭疽病的抗性密切相關(guān)，通過(guò)檢測(cè)酶活的變化可作為抗病性鑒別的一個(gè)指標(biāo)。 本實(shí)驗(yàn)利用RT-PCR法結(jié)合RACE技術(shù)，從Mineirao柱花草中成功克隆出PAL基因全長(zhǎng)cDNA序列，

3、最大閱讀框2154bp。 本研究通過(guò)對(duì)不同柱花草種質(zhì)對(duì)炭疽病的抗性鑒定，在驗(yàn)證了PAL在Mineirao柱花草抗炭疽病方面起一定作用的基礎(chǔ)上克隆出PAL基因，利用半定量RT-PCR檢測(cè)該基因在兩種柱花草中的差異性表達(dá)，分析表明，Mineirao表達(dá)量高于CIAT2312柱花草，推測(cè)出該基因與抗炭疽病有關(guān)。 在PAL基因的編碼框以啟始密碼子ATG和終止密碼子TAG為兩端設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物，分別在引物5’端引人XbaI和Xma