5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠治療中晚期胰腺癌的實驗研究.pdf

1、胰腺癌是惡性程度比較高的消化道腫瘤，且預(yù)后較差，近幾年發(fā)病率有上升的趨勢，往往確診時患者已經(jīng)處于中晚期，大多已發(fā)生轉(zhuǎn)移，外科手術(shù)的切除率低，在臨床上全身化療是主要相關(guān)的治療手段。而胰腺癌為低血供腫瘤，在全身化療時，能達(dá)胰腺癌腫瘤組織，且能起作用的化療藥物劑量是很少的;一旦提高化療藥物的劑量，勢必增加化療藥物所帶來的全身毒副作用，如惡心、嘔吐等;使患者難以耐受化療所帶來的痛苦。內(nèi)鏡下介入治療主要有碘125放射粒子的種植，細(xì)針注射治療，射頻

2、消融治療，光動力治療等方法。超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下給藥治療也成為治療中晚期胰腺癌一種利器。近些年來藥學(xué)方面緩釋給藥有很大的研究進(jìn)展。間質(zhì)化療越來越被大家所熟知，所謂間質(zhì)化療就是通過外科手術(shù)中，或在B超、CT等引導(dǎo)下經(jīng)穿刺等途徑把所需化療藥物和相關(guān)的載體所形成的藥物植入到腫瘤瘤體的內(nèi)部。近年來關(guān)于緩釋微球、緩釋化療粒子入等相關(guān)實驗研究所顯示，利用給藥載體在體內(nèi)的緩釋降解原理，從而達(dá)到對化療藥物持續(xù)給藥的作用，使化療藥物在腫瘤的局部形成較高的濃度，

3、達(dá)到腫瘤組織靶向治療目的，既能明顯的延長化療藥物的作用于腫瘤組織的時間，而又不增加化療藥物的相關(guān)全身毒性反應(yīng)。本實驗研究所用5-氟尿嘧啶溫敏凝膠，能形成穩(wěn)定的納米膠束，溫敏水凝膠特點是具有溫度敏感性及緩慢釋放的作用。藥物冷藏保存，給藥前在4℃-25℃為液體狀態(tài)，而隨著溫度的升高，直至28℃-37℃則逐步形成凝膠狀態(tài)，能做到液態(tài)給藥，而在瘤體內(nèi)達(dá)到生理溫度時形成凝膠狀態(tài)，藥物固定性好，減少藥物流失，進(jìn)一步實現(xiàn)化療藥物的緩釋作用。本課題將嘗

4、試在裸鼠的動物模型上進(jìn)一步探討5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠治療中晚期胰腺癌的臨床效果，評價藥物的療效及安全性，設(shè)想利用超聲內(nèi)鏡介導(dǎo)將5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠的緩釋劑型，應(yīng)用到人體的胰腺癌組織，達(dá)到胰腺癌患者的靶向治療目的，以探索治療中晚期胰腺癌的新的方法。
　　 研究目的:用胰腺癌細(xì)胞株SW1990細(xì)胞，建立Balb/c-nu裸鼠皮下成瘤的胰腺癌動物模型，將5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠注射到裸鼠的皮下瘤體內(nèi)，利用超聲內(nèi)鏡定期觀察裸鼠瘤體體積的

5、改變及超聲圖像的改變，以探討PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠對裸鼠胰腺癌模型的治療效果。
　　 研究方法:(1)在細(xì)胞室培養(yǎng)SW1990胰腺癌細(xì)胞株，在Balb/c-nu裸鼠的皮下種植，定期觀察瘤體的大小，14天后完成裸鼠胰腺癌皮下成瘤的動物模型建立。利用超聲內(nèi)鏡觀察并記錄瘤體的體積。(2)完成PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠體外的釋放實驗:并測定不同時間段浸出液的藥物濃度，計算藥物的釋放量;

6、(3)將胰腺癌SW1990細(xì)胞株皮下成瘤的裸鼠共50只，隨機(jī)的分成5組，其中每組10只。A組為成瘤裸鼠瘤體內(nèi)注射給藥PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠4 mg/kg;B組為成瘤裸鼠瘤內(nèi)注射給藥PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠1 mg/kg;C組為成瘤裸鼠瘤體內(nèi)注射給藥5-氟尿嘧啶注射液4 mg/kg;D組成瘤裸鼠瘤體內(nèi)注射給藥PLGA-PEG-PLGA基質(zhì)4 mg/kg;E組為空白的對照組。(4)于給藥

7、前及給藥后3天、7天、10天、14天應(yīng)用超聲內(nèi)鏡觀察皮下成瘤裸鼠的腫瘤結(jié)節(jié)生長及超聲聲像圖像，記錄圖像特點及瘤體體積的改變，并繪制腫瘤生長曲線;(5)14天時處死實驗裸鼠的動物模型，取瘤體并稱重，計算藥物的抑瘤率;標(biāo)本固定、脫水、石蠟包埋，切片觀察，并行HE染色，觀察不同不同實驗組的病理結(jié)果并記錄。
　　 研究結(jié)果:(1)將胰腺癌SW1990細(xì)胞株皮下成瘤的裸鼠共50只模型建造順利完成，并以詳細(xì)記錄所有瘤體的體積。(2)PLGA

8、-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠藥物緩釋實驗完成，藥物的釋放率第1天為21.6％，第3天為33.8％，第5天為44.3％，第8天為63.6％，第10天為76.3％，第14天為91.8％。(3)將胰腺癌SW1990細(xì)胞株皮下成瘤的裸鼠共50只隨機(jī)分成5組，5組皮下成瘤裸鼠的模型分別按照實驗要求完成瘤體內(nèi)給藥，并用超聲內(nèi)鏡于不同時段測量瘤體的體積，記錄并分析結(jié)果，C組實驗裸鼠死亡1只，死亡時間是給藥后的第5天，其余動物實驗過程中未

9、見死亡。其中A組、B組瘤體體積第14天超聲內(nèi)鏡所測得的數(shù)據(jù)顯示腫瘤體積較給藥前是明顯的縮小;其中A組較B組的更為明顯;其中C組的裸鼠給藥后3天所測得超聲內(nèi)鏡圖像顯示裸鼠瘤體的體積較前有所縮小，但其后腫瘤體積較前有增長的趨勢;D組和E組，腫瘤體積一直是呈明顯的增長趨勢;所有試驗組的瘤體體積記錄好并運用統(tǒng)計學(xué)軟件分析。(4)A組、B組、C組、D組、E組實驗動物2周時，所有動物處死，標(biāo)本行病理組織學(xué)切片。并計算各組的腫瘤壞死面積，分析超聲內(nèi)鏡

10、下圖像特點與病理結(jié)果具相關(guān)性。
　　 結(jié)論:(1) Balb/c-nu裸鼠應(yīng)用SW1990細(xì)胞株皮下成瘤的胰腺癌模型建造的方法簡單，方便，且成瘤率高。(2) PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠的體外釋放實驗顯示，PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠能在14天內(nèi)在體外較穩(wěn)定的達(dá)到持續(xù)緩慢釋放，并對人胰腺癌細(xì)胞株SW1990有持續(xù)抑制作用。(3) PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠于裸鼠

11、胰腺癌皮下成瘤的瘤內(nèi)注射可明顯抑制胰腺癌裸鼠瘤體的生長，其中實驗過程可見凝膠狀制劑的劑型較液態(tài)劑型更容易在瘤體存留，能達(dá)到瘤體內(nèi)固定性好，流失少的優(yōu)勢;利用超聲內(nèi)鏡監(jiān)測下5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠間質(zhì)給藥治療胰腺癌的實驗方法的操作方便且安全，所得到的實驗數(shù)據(jù)也比較精確;實驗數(shù)據(jù)顯示的實驗組的PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠治療組的治療效果也較明確，PLGA-PEG-PLGA-5-氟尿嘧啶溫敏水凝膠制劑具有一定的潛在應(yīng)用價值