MALDI-TOFMS技術(shù)快速鑒定病原菌的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）技術(shù)是一種軟電離新型有機(jī)質(zhì)譜，可在幾分鐘內(nèi)對(duì)不同種類的病原菌進(jìn)行鑒定，和以往病原菌鑒定方法相比，在鑒定速度上有了質(zhì)的突破。本研究利用MALDI-TOF MS與全自動(dòng)微生物生化鑒定儀Vitek2對(duì)本實(shí)驗(yàn)室69

2、0株病原菌進(jìn)行鑒定，以探討MALDI-TOF MS在病原菌鑒定診斷方面的優(yōu)勢(shì)與不足，為MALDI-TOF MS臨床應(yīng)用提供理論支持和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　分離深圳市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室從2014年5月至2014年10月經(jīng)臨床標(biāo)本培養(yǎng)出的690株病原菌；挑取培養(yǎng)基中單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色、觀察菌落形態(tài)；采用Vitek MS和Vitek2對(duì)菌株進(jìn)行鑒定，Vitek MS與Vitek2鑒定結(jié)果不一致的菌株進(jìn)行16S r

3、RNA基因序列測(cè)定分析或ITS2基因序列測(cè)定分析；比較Vitek MS與Vitek2對(duì)各類病原菌鑒定到種、屬水平的準(zhǔn)確率。
　　結(jié)果：
　　分離培養(yǎng)的菌株經(jīng)涂片染色可初步鑒定為革蘭陰性菌的有356株，革蘭陽(yáng)性菌的有241株，類酵母菌有93株。經(jīng)Vitek MS與Vitek2對(duì)690株菌進(jìn)行鑒定，共568株細(xì)菌鑒定結(jié)果一致，其中包括革蘭陰性菌348株，革蘭陽(yáng)性菌220株；共有29株細(xì)菌兩種方法鑒定結(jié)果不一致；對(duì)93株類酵母菌進(jìn)

4、行鑒定，共有76株類酵母菌鑒定結(jié)果一致，17株類酵母菌鑒定結(jié)果不一致；對(duì)結(jié)果不一致細(xì)菌采用16S rRNA基因序列測(cè)定進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)這29株細(xì)菌中，Vitek MS屬水平上的準(zhǔn)確率為89.65％（26/29），種水平上的準(zhǔn)確率為72.41%（21/29），Vitek2屬水平上的準(zhǔn)確率為48.28%（14/29），種水平上的準(zhǔn)確率為6.90%（2/29），Vitek MS在屬水平及種水平的鑒定準(zhǔn)確率均顯著高于 Vitek MS（P<0.0

5、1）；對(duì)結(jié)果不一致的類酵母菌采用ITS2基因序列測(cè)定分析，發(fā)現(xiàn)這17株類酵母菌中，Vitek MS的準(zhǔn)確率為100%（17/17），Vitek2為0%（0/17）。對(duì)93株類酵母菌鑒定Vitek MS的準(zhǔn)確率為100.00%（93/93），Vitek2準(zhǔn)確率為81.72%（76/93），Vitek MS對(duì)類酵母菌的鑒定準(zhǔn)確率顯著高于Vitek2（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　MALDI-TOF MS技術(shù)在病原菌鑒定中的準(zhǔn)