XCT790通過下調(diào)雌激素相關(guān)受體α的表達(dá)抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、目的：血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)的異常增殖是動脈粥樣硬化及PCI術(shù)后血管再狹窄等心血管疾病發(fā)生和發(fā)展的重要病理過程。本研究考察了雌激素相關(guān)受體α（estrogen-related receptorα，ERRα）的特異性反向激動劑XCT790對大鼠VSMCs增殖的影響及相關(guān)分子信號傳導(dǎo)機制，并進一步探討ERRα作為治療心血管疾病治療靶點的可行性。
　　方法：采用組織塊貼壁法

2、原代培養(yǎng)大鼠胸主動脈VSMCs，選取3～8代生長狀態(tài)良好的VSMCs用于實驗，以10％胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)刺激VSMCs增殖。分組后分別加入不同濃度的XCT790干預(yù)不同時間，以CCK-8試劑檢測XCT790對VSMCs增殖的影響;以RT-PCR考察VSMCs中ERRα及其靶基因PGC-1α、OPN和MCAD的mRNA表達(dá)水平;以Western blotting檢測ERRα和p-ERK1/2的蛋白表達(dá)

3、水平;以ELISA法檢測VSMCs中分泌的VEGF蛋白水平。采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，并用GraphPad Prism5軟件作圖。所有實驗數(shù)據(jù)均以(-x)±s表示，多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05表示結(jié)果存在顯著差異，P＜0.01表示結(jié)果存在非常顯著差異。
　　結(jié)果：⑴采用的組織塊貼壁法簡便、可靠、經(jīng)濟，以該法原代培養(yǎng)所得的大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞活性良好，第3～8代V

4、SMCs純度高、質(zhì)量好，可用于進一步的XCT790干預(yù)實驗。⑵XCT790抑制大鼠胸主動脈VSMCs的增殖，在5～20μmol/L劑量范圍內(nèi)呈顯著劑量依賴（P＜0.05），在10～20μmol/L劑量范圍內(nèi)呈顯著時間依賴（P＜0.05）。⑶XCT790抑制VSMCs中ERRα的mRNA與蛋白表達(dá)，在10～20μmol/L劑量范圍內(nèi)呈顯著時間-劑量依賴（P＜0.05）。⑷XCT790干預(yù)的VSMCs中，ERRα的下游靶基因PGC-1α、O

5、PN及MCAD的mRNA水平均有不同程度的下調(diào)，XCT790濃度在10～20μmol/L范圍內(nèi)時，抑制作用呈時間-劑量依賴(P＜0.05)。⑸XCT790抑制VSMCs中VEGF蛋白分泌，在5～20μmol/L劑量范圍內(nèi)呈顯著時間-劑量依賴(P＜0.05)。⑹XCT790下調(diào)VSMCs中p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平，抑制了ERK磷酸化，在10～20μmol/L劑量范圍內(nèi)呈顯著的時間-劑量依賴特征(P＜0.05)。
　　結(jié)論：XCT