2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體(Transporter associated with antigen processing,TAP)屬ABC(ATP-bindingcassette,ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)器家族,其編碼基因TAP1和TAP2均位于主要組織相容性復(fù)合體(Majorhistocompatibility complex,MHC)。TAP1和TAP2編碼的蛋白組成二聚體。在不同種屬動(dòng)物體內(nèi),TAP1和TAP2在MHC上的具體位置不同。TAP在多種伴

2、侶分子的協(xié)同下,包括鈣網(wǎng)蛋白、鈣聯(lián)蛋白、氧化還原酶ERp57和TAP相關(guān)蛋白(tapasin)等,將胞漿內(nèi)被蛋白酶體降解的內(nèi)源性抗原肽轉(zhuǎn)運(yùn)至內(nèi)質(zhì)網(wǎng),與MHCⅠ類分子結(jié)合,所形成的MHC-肽復(fù)合物通過高爾基體被提呈到細(xì)胞表面,引起細(xì)胞毒性T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。TAP蛋白的缺失和突變會(huì)影響抗原肽的提呈,最終損害免疫應(yīng)答功能。
  本研究采用RT-PCR技術(shù)從HBK-SPF鴨脾臟中擴(kuò)增得到TAP1和TAP2基因,序列分析表明TAP2基因的多

3、態(tài)性高于TAP1。利用單核苷酸多態(tài)性(SNP)分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)正在選育的第3代單倍型鴨的TAP2基因型進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性監(jiān)測(cè),結(jié)果表明單倍型鴨的MHC型保持穩(wěn)定。經(jīng)過序列比對(duì),A2品系的SNP最多,進(jìn)一步對(duì)A2品系的TAP1和TAP2基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。
  將A2單倍型鴨的TAP1(A2TAP1)全部編碼區(qū)和A2 TAP2的肽結(jié)合區(qū)分別克隆至pET-30a(+),成功構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET-A2TAP1和pET-A2TAP2

4、PBD,并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),獲得以包涵體形式存在的特異性條帶,大小分別約為51kDa和22kDa重組蛋白。重組蛋白免疫BALB/c小鼠,制備并純化了鼠多抗血清。
  將編碼A2TAP1和A2TAP2的全基因同時(shí)克隆到真核表達(dá)載體pIRES中,獲得真核表達(dá)質(zhì)粒pIRES-A2TAP1-A2TAP2。利用Amaxa Cell Line Nucleofector KitL將質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染至小鼠淋巴細(xì)胞系R

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