一個(gè)水稻黃綠葉突變體的鑒定與基因克隆.pdf

1、葉色突變體是研宄光合作用的重要材料。在以日本晴為受體的轉(zhuǎn)基因株系中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)黃綠葉突變體。本研究以該突變體為研究對(duì)象，開展了表型鑒定、遺傳分析、基因克隆和初步功能分析的研究。主要研究結(jié)果如下:
　　突變體從苗期至成熟期一直表現(xiàn)為黃綠葉表型，因此將該突變體命名為ygl12。葉綠素含量分析顯示，與野生型相比，突變體葉綠素含量在不同時(shí)期均低于野生型，其中葉綠素a的含量降低幅度最大。光溫敏實(shí)驗(yàn)顯示突變表型對(duì)光照強(qiáng)度敏感，但對(duì)溫度鈍感。葉綠

2、體超微結(jié)構(gòu)分析表明突變體的葉綠體發(fā)育異常。與野生型相比，突變體有開花時(shí)間延遲，有效分蘗數(shù)、結(jié)實(shí)率、干粒重減小，劍葉變長變寬，主穗變長等表型。
　　遺傳分析表明突變性狀是由一對(duì)核隱性基因所控制。潮霉素分析表明突變性狀并不是T-DNA插入引起的，因此我們采用圖位克隆的方法克隆目的基因。利用突變體ygl12與龍?zhí)馗Φ碾s交構(gòu)建了用于圖位克隆的定位群體，利用21個(gè)F2代突變個(gè)體，首先將突變基因初定位于12號(hào)染色體SSR標(biāo)記ML7與L55之間

3、大約6.5cM的區(qū)段。利用F2代中的突變個(gè)體共1776個(gè)，構(gòu)建ygl12附近的高密度物理圖譜。最終將目標(biāo)基因定位于插入刪除標(biāo)記YG4與YG5兩標(biāo)記之間76.5kb的區(qū)段。水稻基因組自動(dòng)注釋計(jì)劃網(wǎng)站上發(fā)現(xiàn)該區(qū)段有12個(gè)ORF，測(cè)序發(fā)現(xiàn)在LOC_Os12g23180基因有39bp的刪除。推測(cè)LOC_Os12g23180即為目標(biāo)基因。通過互補(bǔ)試驗(yàn)驗(yàn)證了推測(cè)。
　　熒光定量PCR試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ygl12中大部分參與葉綠素合成的基因轉(zhuǎn)錄本含量上調(diào)