右旋檸烯對人胃癌細(xì)胞骨架重構(gòu)和抗轉(zhuǎn)移作用研究.pdf

1、胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一，其病死率居各種惡性腫瘤之首。根治性手術(shù)為目前其主要治療手段，但術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率仍較高，也是多數(shù)患者死亡的原因。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤重要的生物學(xué)行為，其中腫瘤細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力對腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移中扮演著相當(dāng)重要的角色，而有效遷移行為的達(dá)成又來源于胞內(nèi)、外調(diào)節(jié)因子對細(xì)胞骨架動(dòng)力裝置的調(diào)節(jié)，因此針對以細(xì)胞骨架為治療靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物研究成為新的熱點(diǎn)。右旋檸烯是中藥桔皮中提純的單體成份，屬于天然單萜烯類化合物，具有

2、防治化學(xué)致癌物誘導(dǎo)的乳腺癌、皮膚癌、肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌和胰腺癌等作用，其低毒、廣譜和食用性特征使其具有重要的研究價(jià)值。目前研究表明右旋檸烯能誘導(dǎo)致癌物代謝的酶類表達(dá)，使致癌物解毒、癌癥細(xì)胞凋亡、細(xì)胞再分化和/或抑制了細(xì)胞生長調(diào)節(jié)蛋白轉(zhuǎn)移酶的異丙基化和微淋巴管的形成，但是對其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞骨架重構(gòu)，抑制細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力的方面研究未有報(bào)道。本研究通過觀察右旋檸烯對人胃癌細(xì)胞SGC-7901微絲骨架重構(gòu)的影響和對F-肌動(dòng)蛋白交聯(lián)結(jié)合蛋白f

3、ascin的研究來為右旋檸烯在臨床的應(yīng)用提供新的抗腫瘤轉(zhuǎn)移理論依據(jù)。 本課題分兩部分完成: 第一部分 右旋檸烯對人胃癌細(xì)胞體外生長增殖和侵襲能力的影響。 目的：探討不同濃度的右旋檸烯對高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移人胃癌細(xì)胞株（SGC-7901）體外生長和侵襲能力等生物學(xué)行為的影響。 方法：1、以MTT比色法檢測不同濃度右旋檸烯對胃癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，并確定右旋檸烯相對無毒劑量。2、應(yīng)用集落形成實(shí)驗(yàn)評價(jià)不同濃度右旋

4、檸烯對胃癌細(xì)胞增殖潛能的影響。3、用Transwell小室重建基底膜侵襲模型評價(jià)不同濃度右旋檸烯對胃癌細(xì)胞SGC-7901體外侵襲能力的影響。 結(jié)果：1、右旋檸烯0．25mmol/L以上劑量對胃癌細(xì)胞具有明顯細(xì)胞毒作用，具體量效關(guān)系。2、無明顯細(xì)胞毒劑量的右旋檸烯能有效抑制胃癌細(xì)胞增殖能力，在0．25mmol/L，0．125mmol/L，0．0625mmol/L濃度上集落形成實(shí)驗(yàn)抑制率分別為72．9%：33．3%，6．9%。3、

5、無明顯細(xì)胞毒劑量的右旋檸烯能有效抑制胃癌細(xì)胞侵襲潛能，在0．25mmol/L，0．125mmol/L，0．0625mmol/L濃度上抑制率分別為57．6%，45．3%，32．1%。 結(jié)論：右旋檸烯對胃癌細(xì)胞SGC-7901具有明顯的細(xì)胞毒作用可顯著抑制其體外生長能力，并具有量效關(guān)系。在無明顯細(xì)胞毒的劑量下，右旋檸烯能夠有效抑制胃癌細(xì)胞體外增殖和侵襲能力，并具有量效關(guān)系。 第二部分 右旋檸烯對人胃癌細(xì)胞骨架重構(gòu)及相

6、關(guān)蛋白Fascin的研究。 目的：探討右旋檸烯對胃癌細(xì)胞（SGC-7901）細(xì)胞微絲骨架結(jié)構(gòu)重構(gòu)影響和fascin與細(xì)胞骨架F-肌動(dòng)蛋白的關(guān)系。 方法：1．利用FITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽為熒光探針，用激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度右旋檸烯作用后胃癌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架（F-actin）重構(gòu)情況。2．免疫組織化學(xué)方法觀察fascin在胃癌中的表達(dá)情況。3．蛋白印跡方法定量檢測不同濃度右旋檸烯作用后胃癌細(xì)胞fascin表達(dá)。

7、 結(jié)果：1．右旋檸烯作用后，胃癌細(xì)胞微絲骨架明顯發(fā)生重構(gòu)，微絲纖維結(jié)構(gòu)和分布發(fā)生明顯改變。2．免疫組化顯示58例胃癌組織標(biāo)本中23例（39．7%）表達(dá)陽性，胃癌分化程度越低、腫瘤組織漿膜侵犯陽性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性、胃癌TNM分期高者fascin表達(dá)明顯升高，并與病理組織學(xué)分型密切相關(guān)。3．蛋白印跡法顯示右旋檸烯作用后胃癌細(xì)胞fascin含量降低，藥物濃度越高，降低越明顯。 結(jié)論：fascin的高表達(dá)與胃癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。