白介素6對小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系Y1皮質(zhì)醇合成的影響.pdf

1、[目的]：
　　觀察白介素6(interleukin-6，IL-6)受體在小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系Y1的表達(dá)，研究IL-6對Y1細(xì)胞活性的影響，進(jìn)一步檢測IL-6對Y1細(xì)胞合成皮質(zhì)醇的影響，同時探討IL-6影響Y1細(xì)胞皮質(zhì)醇合成的作用機(jī)制。
　　[方法]：
　　1、小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系Y1進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，判定IL-6受體是否在Y1細(xì)胞表達(dá):應(yīng)用RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在mRNA和蛋白水平檢測IL-6受體，這是下一步研究

2、的基礎(chǔ)。
　　2、Y1細(xì)胞分組培養(yǎng):(1)對照組:常規(guī)培養(yǎng);(2)IL-6組:IL-6濃度100ng/ml;(3) ACTH組:ACTH濃度10-9mol/l;(4)IL-6+ACTH組:100ng/ml IL-6和10-9mol/l ACTH，分別培養(yǎng)3、6、12、24小時后，應(yīng)用臺盼藍(lán)拒染法檢測各組Y1細(xì)胞的活細(xì)胞數(shù)目，以排除Y1細(xì)胞活性對皮質(zhì)醇合成的影響。
　　3、Y1細(xì)胞進(jìn)行分組培養(yǎng)，分組及培養(yǎng)方法同前，應(yīng)用放射免疫

3、法分別檢測3、6、12、24小時后各組Y1細(xì)胞皮質(zhì)醇合成量。
　　4、Y1細(xì)胞進(jìn)行分組培養(yǎng)，分組及培養(yǎng)方法同前，應(yīng)用熒光實時定量PCR法檢測24小時后皮質(zhì)醇合成通路中關(guān)鍵調(diào)控基因StAR、CYP11A1、3β-HSD1的mRNA在各組Y1細(xì)胞的表達(dá)。
　　[結(jié)果]：
　　1、RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn):IL-6受體的mRNA和蛋白在Y1細(xì)胞表達(dá)為陽性。
　　2、100ng/ml IL-6單獨(dú)或聯(lián)合10-9

4、mol/l ACTH作用于Y1細(xì)胞不同時間后活細(xì)胞計數(shù)與對照組相比無明顯差異性（P＞0.05）。
　　3、100ng/ml IL-6作用Y1細(xì)胞不同時間后，皮質(zhì)醇合成量增加(P＜0.05);10-9mol/lACTH單獨(dú)作用，細(xì)胞合成皮質(zhì)醇量顯著增加(P＜0.05);100ng/ml IL-6和10-9mol/l ACTH共同處理Y1細(xì)胞后皮質(zhì)醇合成量進(jìn)一步明顯增加（P＜0.01）。
　　4、100ng/ml IL-6單獨(dú)或

5、聯(lián)合10-9mol/l ACTH作用于Y1細(xì)胞24小時后，關(guān)鍵調(diào)控基因StAR mRNA、CYP11A1 mRNA、3β-HSD1 mRNA的表達(dá)與對照組相比上升(P＜0.05）。
　　[結(jié)論]：
　　1、從mRNA、蛋白水平證實了Y1細(xì)胞可表達(dá)IL-6受體。
　　2、IL-6單獨(dú)或聯(lián)合ACTH處理Y1細(xì)胞不同時間后對細(xì)胞活性無顯著影響。
　　3、IL-6單獨(dú)或聯(lián)合ACTH作用Y1細(xì)胞一定時間后皮質(zhì)醇合成增加，可