內(nèi)源性硫化氫對(duì)硫酸鈹致大鼠肺損傷的保護(hù)作用及其PI3K-Akt依賴機(jī)制.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)采用非暴露式氣管內(nèi)滴注硫酸鈹(BeSO4)染毒 SD大鼠，并用內(nèi)源性硫化氫(H2S)供體硫氫化鈉(NaHS)和肺組織中內(nèi)源性H2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)抑制劑DL-炔丙基甘氨酸(PPG)干預(yù)，觀察BeSO4對(duì)大鼠肺組織的損傷，闡明內(nèi)源性H2S對(duì)BeSO4致大鼠肺組織損傷的作用并探討其機(jī)制。
　　方法：
　　選擇健康、無特定病原體級(jí)（SPF級(jí)）、體重180±20g、雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分

2、為對(duì)照組、BeSO4組、BeSO4+NaHS組和BeSO4+PPG組，每組12只。對(duì)照組一次性氣管內(nèi)滴注0.001ml/g·BW滅菌生理鹽水溶液，30min后腹腔注射0.01ml/g·BW滅菌生理鹽水溶液；其余3組均一次性氣管內(nèi)滴注12mg/kg的BeSO4滅菌生理鹽水溶液，30min后分別腹腔注射滅菌生理鹽水溶液、14μmol/L NaHS滅菌生理鹽水溶液和37.5mg/kg PPG滅菌生理鹽水溶液。染毒后觀察大鼠的活動(dòng)、飲食、精神狀

3、態(tài)、呼吸及生長(zhǎng)發(fā)育等一般情況，兩周稱重一次。7周后采用頸動(dòng)脈放血法處死大鼠，收集血液并制備血漿，采用去蛋白法測(cè)定血漿中內(nèi)源性H2S含量。取出肺臟，稱重，結(jié)扎右主支氣管后對(duì)左肺行支氣管肺泡灌洗(BAL)，收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)行炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)。右肺組織分成三份，取右上肺固定，光鏡下觀察肺組織病理形態(tài)，電鏡下觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)；取右中肺組織制備勻漿，檢測(cè)肺組織中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)及內(nèi)源性H2S含量，超氧化物歧化酶(S

4、OD)及谷胱甘肽過氧化酶(GPx)活性；右下肺組織提取總RNA和蛋白，采用RT-PCR檢測(cè)CSE、SOD及GPx mRNA的表達(dá)，免疫蛋白印跡法(Western Blot)檢測(cè)CSE、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、總Akt(t-Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)、p53、Bax及Bcl-2蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、染毒后，BeSO4組和BeSO4+PPG組大鼠活動(dòng)及進(jìn)食量明顯減少，精神萎靡，后期有部分大鼠呼吸急促

5、；對(duì)照組和BeSO4+NaHS組飲食、活動(dòng)、精神狀態(tài)及呼吸均正常。與對(duì)照組比較，BeSO4組和BeSO4+PPG組大鼠體重增長(zhǎng)緩慢，部分大鼠體重下降，第5周和第7周時(shí)BeSO4+PPG組大鼠體重低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在第7周時(shí) BeSO4+PPG組大鼠體重低于BeSO4+NaHS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。動(dòng)物處死后， BeSO4組和BeSO4+PPG組大鼠肉眼可見肺臟淤血腫大，質(zhì)地較硬，部分可見白色

6、小斑點(diǎn)；對(duì)照組和BeSO4+NaHS組肺臟肉眼未見明顯異常。
　　2、大鼠肺組織病理形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)：對(duì)照組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常， BeSO4組和BeSO4+PPG組肺組織均可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維組織及巨噬細(xì)胞增生，甚至壞死；肺組織超微結(jié)構(gòu)損傷明顯，細(xì)胞核固縮，肺間質(zhì)纖維化，氣血屏障結(jié)構(gòu)改變。BeSO4+NaHS組大鼠肺組織損傷明顯較輕。
　　3、與對(duì)照組比較，BeSO4組、BeSO4+NaHS組和BeSO4+PPG組肺臟臟器

7、系數(shù)、肺組織中ROS和MDA含量及BALF中炎性細(xì)胞數(shù)均升高，血漿及肺組織中內(nèi)源性H2S含量、肺組織中SOD及GPx活性均降低，肺組織中CSE、SOD、GPx mRNA的表達(dá)及CSE、PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白的表達(dá)均下調(diào)，p53及Bax蛋白表達(dá)均上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NaHS干預(yù)明顯減輕大鼠肺組織損傷，PPG干預(yù)則明顯加重大鼠肺組織損傷(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、氣管內(nèi)滴注BeSO